益腎化瘀湯促進(jìn)骨髓抑制模型大鼠巨核系造血的機(jī)制研究.pdf

1、背景及目的：再生障礙性貧血是血液系統(tǒng)常見(jiàn)病，由多種原因造成骨髓造血功能衰竭，以全血細(xì)胞減少為特征的一種臨床綜合征。中醫(yī)學(xué)中雖無(wú)“再障”此病名記載，但根據(jù)其主要臨床表現(xiàn)可歸屬于“虛勞”、“血癥”范疇，其“腎虛血瘀致日久氣血兩虧”的發(fā)病機(jī)理日益受到學(xué)者們的重視，已證實(shí)益腎化瘀療法對(duì)再生障礙性貧血有肯定的療效，研究表明該療法通過(guò)改善骨髓造血微環(huán)境、調(diào)節(jié)造血正負(fù)調(diào)控因子以及抑制造血細(xì)胞的過(guò)度凋亡從而改善骨髓的造血機(jī)能，但現(xiàn)有的研究結(jié)果并未解釋其

2、全部機(jī)理。
　　 中醫(yī)理論強(qiáng)調(diào)整體辨證施治，重視臟腑之間聯(lián)系。腎主骨生髓藏精，精血同源，故腎虛與“血癥”關(guān)系密切，此外髓充為腦，腎虛也與許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)。近年來(lái)多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)與造血調(diào)控有密切關(guān)系。5-羥色胺是一種吲哚胺，在中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)中有著重要生理作用，同時(shí)它也是一種造血生長(zhǎng)因子，已證實(shí)5-羥色胺能促進(jìn)巨核細(xì)胞的增殖，在體外能擴(kuò)增CD34+細(xì)胞，與多巴胺協(xié)同調(diào)控粒系造血。神經(jīng)系統(tǒng)研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎活血類(lèi)中藥可通過(guò)調(diào)節(jié)中

3、樞5-羥色胺的分泌及多巴胺能神經(jīng)功能而影響大腦功能，提示造血系統(tǒng)與神經(jīng)系統(tǒng)之間關(guān)系可能通過(guò)5 －羥色胺聯(lián)系。
　　 基于上述論據(jù)，提出益腎化瘀療法治療血癥的機(jī)理之一是通過(guò)調(diào)節(jié)5 －羥色胺及其受體表達(dá)調(diào)節(jié)造血。我們前期研究已成功建立急性骨髓抑制SD 大鼠模型，并證實(shí)補(bǔ)腎化瘀湯可促進(jìn)急性骨髓抑制模型SD 大鼠骨髓造血、減輕其骨髓間質(zhì)水腫和提高血漿5 羥色胺濃度，同時(shí)發(fā)現(xiàn)5-HT 濃度升高與造血恢復(fù)呈正相關(guān)。
　　 本研究進(jìn)一

4、步探討益腎化瘀湯是否通過(guò)5-羥色胺受體促進(jìn)急性骨髓抑制模型大鼠巨核系造血，從而完善補(bǔ)腎化瘀中藥治療血癥的機(jī)理研究，深化對(duì)中醫(yī)臟腑聯(lián)系、辨證施治原理的認(rèn)識(shí)。
　　 方法：32 只SD 大鼠隨機(jī)分為4 組，每組8 只，分別為：空白對(duì)照組；模型對(duì)照組；中藥組；中藥+5 羥色胺受體拮抗劑酮色林組。造模采用5-FU 聯(lián)合白消安化療法，造模第一天予5-FU（150mg/kg ）腹腔注射，第五天白消安（15mg/kg ）灌胃一次，此后每周給予

5、白消安一次，連續(xù)3 周，酮色林2mg/（kg.d ），對(duì)照組予等量生理鹽水相同方法處理。造模完成后第二天予補(bǔ)腎化瘀湯（生藥2g/ml ），0.2ml/10g，連續(xù)灌胃16天，空白及模型對(duì)照組予等體積生理鹽水灌胃，第16天脫臼處死大鼠，采用密度梯度離心法（大鼠淋巴細(xì)胞分離液）獲取骨髓單個(gè)核細(xì)胞并用0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMMC 表面CD41和5-HTR2A的表達(dá)情況；最后用巨核細(xì)胞膠原蛋白培養(yǎng)基行巨核細(xì)胞集落培養(yǎng)，觀察巨核

6、細(xì)胞集落及粒單核細(xì)胞集落產(chǎn)率。
　　 結(jié)果：（1 ）大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)（BMMC ）：益腎化瘀湯可顯著提高急性骨髓抑制模型大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)，該效應(yīng)可被酮色林抑制。（2 ）巨核細(xì)胞集落(Mk-CFU)和混合巨核細(xì)胞集落計(jì)數(shù)（mix-Mk-CFU ）：益腎化瘀湯可提高模型大鼠Mk-CFU和mix-Mk-CFU 計(jì)數(shù)，該效應(yīng)可被酮色林抑制。（3 ）粒單核細(xì)胞集落計(jì)數(shù)（GM-CFU ）：益腎化瘀湯可提高模型大鼠GM-CFU 計(jì)

7、數(shù)，而酮色林不能有效抑制該效應(yīng)。（4 ）流式細(xì)胞分析計(jì)數(shù)檢測(cè)BMMC 表面CD41、5-HT2A R 表達(dá)：益腎化瘀湯可上調(diào)模型大鼠BMMC 表面CD41、5-HT2AR 表達(dá)，酮色林僅能抑制CD41 表達(dá)，而對(duì)5-HT2AR 表達(dá)無(wú)影響。
　　 結(jié)論：⑴益腎化瘀湯可通過(guò)上調(diào)5-HT2AR 表達(dá)促進(jìn)急性骨髓抑制模型大鼠巨核祖細(xì)胞生長(zhǎng)。⑵大劑量酮色林體內(nèi)可選擇性阻斷益腎化瘀湯的促巨核祖細(xì)胞生長(zhǎng)作用，但對(duì)粒單核祖細(xì)胞生長(zhǎng)影響不明顯，