心理應(yīng)激對(duì)大鼠咬肌自由基代謝及熱休克蛋白70表達(dá)影響的研究.pdf

1、心理應(yīng)激是指有機(jī)體在某種環(huán)境刺激作用下由于客觀要求和應(yīng)付能力不平衡所產(chǎn)生的一種適應(yīng)環(huán)境的緊張反應(yīng)狀態(tài)。在現(xiàn)代社會(huì)中，各種各樣的應(yīng)激原如激烈的競(jìng)爭(zhēng)、快速的工作節(jié)奏、逐漸增大的生活壓力等等，都在影響著人們的生理和心理狀態(tài)。短期或適度的心理應(yīng)激可提高機(jī)體的警惕水平，有益于人體的健康和功能活動(dòng)，但心理應(yīng)激狀態(tài)時(shí)間過長或強(qiáng)度過大就會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生有害作用。如今，心理應(yīng)激與心身疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系已經(jīng)越來越受到人們的重視?？谇徽５囊Ш瞎δ苁蔷捉兰?、顳下

2、頜關(guān)節(jié)、牙牙合關(guān)系在中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用下相互支持，相互制約的結(jié)果，而咬肌是口頜面部重要的咀嚼肌之一，它參與了口腔咀嚼、吞咽、言語等多種功能活動(dòng)。另外，升頜肌中肌梭等本體感受器分布密度高于降頜肌，而咬肌又是升頜肌中肌梭分布密度最高、對(duì)各種應(yīng)激狀態(tài)的反應(yīng)最為及時(shí)、敏感的一對(duì)肌肉?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)針對(duì)心理應(yīng)激對(duì)口頜肌影響的研究已取得了一定的進(jìn)展。臨床流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)心理應(yīng)激與口頜系統(tǒng)疾病之間存在密切關(guān)系，本系列研究的前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證明，咬肌的形態(tài)學(xué)、肌

3、組織代謝、肌纖維牙型轉(zhuǎn)化、肌肉疼痛閾等諸多方面都與心理因素密不可分。然而，心理應(yīng)激對(duì)咬肌影響的機(jī)制仍不明確，還有待于進(jìn)一步深入的研究。
　　因此，本實(shí)驗(yàn)在課題組前期工作的基礎(chǔ)上，選取咬肌作為切入點(diǎn)，采用心理應(yīng)激交流箱建立大鼠心理應(yīng)激模型，在檢測(cè)動(dòng)物行為學(xué)改變以確保實(shí)驗(yàn)大鼠處于心理應(yīng)激狀態(tài)的基礎(chǔ)上，觀察咬肌組織中自由基代謝、HSP70表達(dá)的變化，并計(jì)算二者之間的相關(guān)性，為更深入研究心理應(yīng)激導(dǎo)致口頜肌疲勞、功能紊亂乃至口頜系統(tǒng)疾病的機(jī)

4、制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為口頜肌功能紊亂的防治奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　本實(shí)驗(yàn)共分為三個(gè)部分。第一部分實(shí)驗(yàn)觀察大鼠心理應(yīng)激后的行為學(xué)變化。選取72只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為心理應(yīng)激組（Psychologicalstressgroup,PS組）、足部電擊組（Footshockgroup，F(xiàn)S組）和空白對(duì)照組，每組24只。各組再按照實(shí)驗(yàn)時(shí)間分為1周、3周和5周三個(gè)亞組，其中空白對(duì)照組不接受任何外界刺激，F(xiàn)S組大鼠接受足部電擊，僅作為應(yīng)激原，最后將P

5、S組和對(duì)照組大鼠納入實(shí)驗(yàn)研究。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間所有大鼠同條件飼養(yǎng)。在各時(shí)間點(diǎn)，測(cè)量大鼠體重，采用高架十字迷宮（Elevatedplusmaze，EPM）實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物曠場(chǎng)（Openfield）實(shí)驗(yàn)觀察心理應(yīng)激對(duì)大鼠行為學(xué)特征的影響。EPM實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：隨著心理應(yīng)激時(shí)間的增長，PS組大鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)逐漸減少，呈現(xiàn)時(shí)間依賴性，進(jìn)入開臂的時(shí)間在心理應(yīng)激3周和5周后與對(duì)照組比較出現(xiàn)差異，5周時(shí)達(dá)到最低；3周和5周PS組大鼠進(jìn)入閉臂次數(shù)少于對(duì)照組，而各

6、實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)在閉臂停留的時(shí)間卻均明顯增長；并且后兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)PS組大鼠在EPM中的移動(dòng)距離也較對(duì)照組減少。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：PS組大鼠應(yīng)激3周和5周后，曠場(chǎng)移動(dòng)速度和移動(dòng)距離小于對(duì)照組，中央?yún)^(qū)活動(dòng)時(shí)間隨心理應(yīng)激時(shí)間遞減，且均低于對(duì)照組。
　　第一部分實(shí)驗(yàn)證實(shí)了心理應(yīng)激可以影響大鼠的行為，在此基礎(chǔ)上我們進(jìn)行第二部分實(shí)驗(yàn)。大鼠心理應(yīng)激建模第1、3、5周行為學(xué)觀察后處死大鼠，取咬肌組織檢測(cè)自由基代謝情況，結(jié)果顯示：肌組織中SOD活力和GSH

7、-PX活力在3周和5周應(yīng)激組中出現(xiàn)降低，但5周PS組較3周PS組的兩種抗氧化酶酶活性均有回升；CAT活力3周和5周PS組均低于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組；PS組大鼠咬肌中MDA含量在3周時(shí)最多，到5周時(shí)又開始減少，但仍高于對(duì)照組；H2O2含量?jī)H3周PS組與對(duì)照組有差異。
　　隨后，在第三部分實(shí)驗(yàn)中，我們運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色和Westernblot方法檢測(cè)咬肌中HSP70的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1周和3周PS組大鼠咬肌中熱休克蛋白70（HSP70

8、）表達(dá)無明顯變化，而心理應(yīng)激5周后，大鼠的HSP70表達(dá)較同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組增強(qiáng)，亦高于1周和3周PS組大鼠。同時(shí)，我們計(jì)算HSP70相對(duì)灰度值與自由基代謝之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)肌組織中HSP70的表達(dá)與MDA含量呈負(fù)相關(guān)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　1、心理應(yīng)激交流箱可有效建立大鼠心理應(yīng)激模型；心理應(yīng)激可以引起大鼠焦慮樣行為。
　　2、心理應(yīng)激狀態(tài)能夠引起大鼠咬肌自由基代謝異常，這可能是心理應(yīng)激導(dǎo)致咀嚼肌功能紊亂的機(jī)制之一。