亞慢性染苯并[a]芘對(duì)大鼠神經(jīng)行為及海馬熱休克蛋白70表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察亞慢性染苯并[a]芘對(duì)大鼠神經(jīng)行的影響，檢測(cè)海馬Hsp70的表達(dá)，探討苯并[a]芘的神經(jīng)毒性及其作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 第一部分：健康雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為空白對(duì)照、游泳對(duì)照、學(xué)習(xí)記憶、熱處理4組。采用Morris水迷宮檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變。行為測(cè)試結(jié)束后，18-24小時(shí)內(nèi)斷頭處死大鼠，免疫組化檢測(cè)Hsp70的表達(dá)，Western-blot檢測(cè)海馬Hsp70的表達(dá)。
　

2、　 第二部分：健康雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為空白對(duì)照、溶劑對(duì)照、B[a]P0.5mg/kg、1.5mg/kg、4.5mg/kg、10mg/kg6組。腹腔注射染毒90天后，采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變；行為測(cè)試結(jié)束，稱取體重后斷頭處死各組大鼠，取腦組織、肝臟、肺臟、腎臟、心臟、脾臟、睪丸，計(jì)算臟器系數(shù)；腦組織作病理切片觀察組織損傷的形態(tài)學(xué)指標(biāo)；Annexin V和PI雙染法流式細(xì)胞儀檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡率；Wes

3、tern-blot和RT-PCR法分別檢測(cè)大鼠海馬Hsp70和Hsp70mRNA的表達(dá)；免疫組化檢測(cè)大鼠海馬Hsp70的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分：大鼠短期學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)：免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：空白對(duì)照組海馬各區(qū)Hsp70零星表達(dá)；游泳對(duì)照組Hsp70在海馬錐體細(xì)胞漿呈彌漫性表達(dá)，CA3區(qū)表達(dá)較少；學(xué)習(xí)記憶組Hsp70在CA3區(qū)高表達(dá)，細(xì)胞漿、突觸均有表達(dá)；熱處理組Hsp70主要在海馬錐體細(xì)胞核呈高度彌漫性表達(dá)。

4、Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示，學(xué)習(xí)記憶組和熱處理組的Hsp70蛋白表達(dá)值分別為0.55±0.07和0.84±0.14，顯著高于空白對(duì)照組(0.37±0.03)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 第二部分：大鼠亞慢性腹腔染毒B[a]P實(shí)驗(yàn)：各組大鼠體重均增長(zhǎng)，各染毒組大鼠體重增長(zhǎng)速度小于空白對(duì)照和溶劑對(duì)照組。從第一個(gè)月開(kāi)始，各染毒組體重均低于空白對(duì)照組，染毒結(jié)束后，各染毒組與空白組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、(P＜0.05)，B[a]P4.5mg/kg組和B[a]P10mg/kg組與溶劑對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 定位航行實(shí)驗(yàn)：B[a]P1.5 mg/kg、4.5 mg/kg和10 rng/kg組逃避潛伏期和總路程分別為32.5S、49.19S、69.74 S和313.57 cm、422.81 cm、632.60 cm，顯著高于空白對(duì)照組(17.17S和252.71 cm)和溶劑對(duì)照組(20.33S和197.08 cm)，差

6、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)?？臻g搜索實(shí)驗(yàn)：B[a]P0.5mg/kg組、1.5mg/kg組、4.5 mg/kg組、10 mg/kg組第三象限持續(xù)時(shí)間和跨越平臺(tái)次數(shù)分別為7.17S、7.93S、6.01 S、5.30 S和1.75次、1.25次、1.20次、0.50次，低于空白組(13.31S和4.20次)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；4.5 mg/kg、10 mg/kg組顯著低于溶劑對(duì)照組(9.97S和3.0次)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義(P＜0.05)。
　　 海馬病理組織學(xué)結(jié)果：常規(guī)HE染色，鏡下可見(jiàn)空白組大鼠海馬錐體層神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，排列整齊，隨著染苯并[a]芘劑量增加，細(xì)胞排列逐漸變零亂，B[a]P4.5 mg/kg組和10 mg/kg組可見(jiàn)細(xì)胞連接松解，胞漿濃縮、深染、細(xì)胞核固縮，細(xì)胞周圍出現(xiàn)環(huán)狀帶。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，B[a]P4.5 mg/kg組、B[a]P10 mg/kg組海馬細(xì)胞凋亡率顯著高于空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

8、意義(P＜0.05)。
　　 RT-PCR檢測(cè)大鼠海馬Hsp70mRNA的表達(dá)，與空白對(duì)照組相比，B[a]P0.5 mg/kg組、4.5mg/kg組和10mg/kg組表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與溶劑對(duì)照組相比，B[a]P10mg/kg組mRNA表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 Western-blot檢測(cè)大鼠海馬Hsp70表達(dá)，B[a]P4.5 mg/kg組、10 mg/kg組

9、Hsp70表達(dá)顯著降低，與空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 免疫組織化學(xué)染色，鏡下可見(jiàn)空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組大鼠海馬區(qū)錐體細(xì)胞層有大量免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞，呈棕黃色。各染毒組部分細(xì)胞核中有Hsp70表達(dá)。B[a]P0.5mg/kg組,免疫陽(yáng)性表達(dá)呈增多的現(xiàn)象。4.5 mg/kg組、10 mg/kg組Hsp70陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞減少。
　　 相關(guān)分析結(jié)果顯示，早期凋亡率與總路程、平均逃避潛伏期、

10、穿越平臺(tái)次數(shù)具有相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r分別為0.527、0.529、-0.401，P＜0.05；大鼠海馬Hsp70表達(dá)值與平均逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.428、0.446，P＜0.05；大鼠海馬Hsp70mRNA表達(dá)量與總路程、平均逃避潛伏期、第三象限持續(xù)時(shí)間、穿越平臺(tái)次數(shù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.594、-0.677、0.597、0.625，P＜0.01。
　　 結(jié)論：
　　 短期學(xué)習(xí)記憶中大鼠海