小麥-華山新麥草衍生后代紋枯病抗性鑒定與華山新麥草Ns染色體特異SCAR標(biāo)記開(kāi)發(fā).pdf

1、華山新麥草（Psathyrostachys huashanica）是小麥重要的野生近緣種之一，具有抗病、抗逆等優(yōu)良性狀，使其成為小麥遠(yuǎn)緣雜交育種研究中寶貴的優(yōu)質(zhì)基因來(lái)源。
　　本研究利用牙簽嵌入接種法對(duì)53份普通小麥和小麥-華山新麥草衍生后代材料進(jìn)行紋枯病抗性鑒定，并結(jié)合分子細(xì)胞學(xué)特征對(duì)篩選出的抗病材料進(jìn)行初步鑒定;利用RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)SCAR標(biāo)記技術(shù)和附加有華山新麥草1Ns-7Ns染色體組的小麥-華山新麥草異附加系材料開(kāi)發(fā)能在小麥

2、背景中對(duì)華山新麥草Ns染色體進(jìn)行識(shí)別檢測(cè)的特異SCAR標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)獲得如下結(jié)果:
　　1.小麥-華山新麥草衍生后代紋枯病抗性評(píng)價(jià)與細(xì)胞學(xué)鑒定
　　苗期小麥紋枯病人工接種鑒定結(jié)果表明，不同材料對(duì)紋枯病的抗性有較大的差異，病情指數(shù)的變異范圍為20.0％-82.0％。抗病等級(jí)表現(xiàn)為抗病(R)及以上的材料11份，占全部供試材料的21.6％，平均病情指數(shù)為26.8％。表現(xiàn)中抗(MR)的材料27份，占全部供試材料的52.9％，平均病情指數(shù)

3、為46.9％。表現(xiàn)中感(MS)或感病(S)的材料13份，占全部供試材料25.5％，平均病情指數(shù)為61.9％。對(duì)11份抗病材料進(jìn)行根尖細(xì)胞有絲分裂中期染色體細(xì)胞學(xué)觀察，所有材料根尖細(xì)胞均含有42條染色體，經(jīng)基因組原位雜交(GISH)鑒定，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)雜交信號(hào)。但抗病材料的農(nóng)藝性狀和其親本7182有顯著的差異，初步分析推斷這些材料為華山新麥草小片段的易位材料并有望在小麥抗紋枯病育種過(guò)程中加以利用。
　　2.小麥-華山新麥草附加系RAPD標(biāo)

4、記擴(kuò)增的特異片段篩選與SCAR標(biāo)記轉(zhuǎn)化
　　用180條RAPD隨機(jī)引物R1-R180(10 bp)，對(duì)附加有華山新麥草1Ns-7Ns染色體組的小麥-華山新麥草異附加系材料進(jìn)行篩選，有5個(gè)RAPD引物分別在1Ns、2Ns、4Ns、5Ns附加系中有特異擴(kuò)增。對(duì)特異片段進(jìn)行切膠純化，利用分子克隆技術(shù)擴(kuò)增特異片段并測(cè)序。經(jīng)測(cè)序得到特異片段的序列，提交NCBI植物基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)，設(shè)計(jì)出5對(duì)SCAR引物并在材料中進(jìn)行驗(yàn)證。新設(shè)計(jì)的SCAR