復(fù)方黃芪顆粒抗肝纖維化作用的實驗研究.pdf

1、肝纖維化以細胞外基質(zhì)(ECM)在肝臟彌漫性過度沉積為病理特征，其形成主要由于肝星狀細胞(HSC)活化，ECM過度生成，降解相對不足，在肝內(nèi)大量沉積所致。因此，抑制HSC活化，減少ECM生成，促進ECM的降解就成為阻斷以及逆轉(zhuǎn)肝纖維化的重要環(huán)節(jié)。ECM降解與調(diào)控主要由基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)及其抑制劑(TIMPs)介導(dǎo)，MMPs降解ECM，阻抑肝纖維化發(fā)生，促進肝纖維化逆轉(zhuǎn)；TIMPs抑制MMPs，促進肝纖維化的形成。大量研究證實肝纖維

2、化是可以逆轉(zhuǎn)的，特別是近年來廣泛開展的中醫(yī)中藥抗肝纖維化的臨床和實驗研究，取得了較顯著的成果，有著非常廣闊的前景。復(fù)方黃芪顆粒是我科的科研制劑，由黃芪、丹參、制何首烏、地耳草等10味中藥組成，具有健脾補腎、疏肝活血、清熱利濕之功效，臨床觀察能有效地抑制乙肝病毒復(fù)制，改善肝功能，但其有無抗肝纖維化作用及可能的作用機制，目前國內(nèi)外尚未見有關(guān)文獻報道。為探討其有無抗肝纖維化作用及作用機制，108只雄性SD大鼠被隨機分為復(fù)方黃芪顆粒高劑量組(F

3、H)、復(fù)方黃芪顆粒低劑量組(FL)、復(fù)方鱉甲軟肝片治療組(R)、模型組(M)和正常對照組(C)。除正常對照組外，其余各組大鼠采用腹腔內(nèi)注射豬血清法誘導(dǎo)免疫損傷性肝纖維化模型，造模成功后分別給予高、低劑量復(fù)方黃芪顆粒治療，應(yīng)用病理組織學(xué)觀察，結(jié)合ECM特殊染色動態(tài)觀察其治療前后組織學(xué)及ECM量的變化，評估復(fù)方黃芪顆粒的抗肝纖維化療效，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色觀察造模結(jié)束時以及藥物治療各時間段肝組織內(nèi)主要MMPs和TIMPs種類，包括MMP-1

4、3、MMP-2、TIMP-1和TIMP-2酶蛋白的表達量變化，以活化HSC特異性標志物a-SMA標記顯示活化HSC的變化，并與復(fù)方鱉甲軟肝片治療組和模型組進行比較，以探討復(fù)方黃芪顆粒抗肝纖維化的可能作用機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大鼠腹腔內(nèi)注射豬血清10周后，各造模組大鼠肝組織均有明顯的纖維化形成，正常對照組大鼠肝組織沒有纖維化形成，造模結(jié)束后，M組大鼠肝組織纖維化程度呈進行性加重，而FH、FL和R組大鼠肝組織纖維化程度雖在治療第1個月結(jié)束時有所加

5、重，但在治療第2個月結(jié)束時肝纖維化明顯逆轉(zhuǎn)，治療第3個月結(jié)束時，逆轉(zhuǎn)更加明顯(P＜0.01)。M組大鼠肝組織隨纖維化程度呈進行性加重，a-SMA、TIMP-1和TIMP-2蛋白表達呈進行性增強，而MMP-13和MMP-2蛋白表達呈漸進性下調(diào)；相對照，F(xiàn)H、FL和R組在治療第2個月結(jié)束時，a-SMA、TIMP-1和TIMP-2蛋白表達明顯減弱，MMP-13和MMP-2蛋白表達明顯增強，治療第3個月結(jié)束時，一些指標上述改變更加顯著，與M組比