APL患者誘導(dǎo)分化治療前后粘附分子ICAM-1和VCAM-1變化與臨床意義.pdf

1、背景：
　　 急性早幼粒細(xì)胞性白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)約占急性非淋巴系白血病的8-15％。在體外全反式維甲酸(all trans retinoicacid，ATRA)誘導(dǎo)HL60，U937和原代APL發(fā)生終末分化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，我國(guó)學(xué)者1986年首次用ATRA治療APL，并獲得成功。在體外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，三氧化二砷(arsenic trioxide，As2O3)被用以治療APL患

2、者，亦獲得成功。
　　 細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecuarl，ICAM-1或CD54)屬于免疫球蛋白超家族成員，是淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-1((LFA-1)的主要配體。作為白細(xì)胞分化抗原，ICAM-1是細(xì)胞黏附、遷移及提呈抗原的重要介導(dǎo)分子，參與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化、細(xì)胞的伸展和移動(dòng)、細(xì)胞的生長(zhǎng)以及分化、炎癥、血栓形成、腫瘤轉(zhuǎn)移、創(chuàng)傷愈合等一系列重要生理和病理過(guò)程。在各種因素作用下，IC

3、AM-1的細(xì)胞膜外部分可脫落進(jìn)入血循環(huán)，成為可溶性形式(Soluble ICAM-1，sICAM-1)。sICAM-1相對(duì)分子質(zhì)量為82×103，仍具有結(jié)合配體LFA-1的活性，從而與多種病理生理過(guò)程有關(guān)，如腫瘤進(jìn)展及免疫抑制。癌癥患者血清sICAM-1水平升高與腫瘤侵犯有關(guān)，初治、治療后未緩解及復(fù)發(fā)性ALL和AML患者的血清sICAM-1水平明顯高于健康人，對(duì)臨床診斷有一定價(jià)值。另外高水平sICAM-1及VCAM-1均與血白細(xì)胞數(shù)顯著

4、相關(guān)，sICAM-1還可影響NK細(xì)胞的活力，并可通過(guò)抑制ICAM-1/LFA-1系統(tǒng)而阻遏免疫反應(yīng)。
　　 關(guān)于血管細(xì)胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1或CD106)的報(bào)道較少，已知培養(yǎng)的活化內(nèi)皮細(xì)胞、人的血清、類風(fēng)濕病人滑膜液中可以檢測(cè)到sVCAM-1。sVCAM-1可以通過(guò)結(jié)合其配體抑制白細(xì)胞向組織的移動(dòng)，同時(shí)還是配體結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)抑制劑。
　　 ICAM-1

5、和VCAM-1作為監(jiān)測(cè)急性白血病的早期復(fù)發(fā)、髓外浸潤(rùn)和判斷預(yù)后的指標(biāo)已得到證實(shí)。探討VCMA和ICMA在APL發(fā)生、發(fā)展和緩解中的作用，并進(jìn)一步明確APL患者誘導(dǎo)分化治療前后粘附分子ICAM-1和VCAM-1變化的臨床意義將有助于為治療難治性、復(fù)發(fā)性白血病開(kāi)辟新途徑。
　　 目的：
　　 檢測(cè)白血病患者As2O3治療前后白細(xì)胞數(shù)量和種類變化，闡明粘附分子sICAM-1和sVCAM-1的表達(dá)、分泌變化規(guī)律，以及As2O3體

6、外誘導(dǎo)后，APL原代細(xì)胞分泌sICAM-1和sVCAM-1的水平變化，并檢測(cè)As2O3治療前后粘附分子ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達(dá)情況，預(yù)期揭示粘附分子sICAM-1和sVCAM-1與白血病之間的關(guān)系以及檢測(cè)粘附分子sICAM-1和sVCAM-1的分泌水平在白血病診斷、治療及預(yù)后監(jiān)測(cè)中的臨床意義。
　　 方法：
　　 采用RT-PCR檢測(cè)PML/RARα融合基因類型；常規(guī)細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)治療前后APL患者外周血白

7、細(xì)胞數(shù)量和分類變化；采用ELISA法檢測(cè)治療前后APL患者外周血粘附分子sICAM-1和sVCAM-1的變化；采用ELISA法檢測(cè)As2O3對(duì)原代APL細(xì)胞分泌sICAM-1和sVCAM-1的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)As2O3治療前后白血病細(xì)胞表面粘附分子CD11b，CD54和CD106的表達(dá)；采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)法檢測(cè)As2O3對(duì)L-CFU集落的影響：通過(guò)RT-PCR檢測(cè)As2O3治療前后APL患者ICAM-1和VCAM-1mRN

8、A表達(dá)變化；采用MTT法檢測(cè)0．5μmol/L的As2O3作用后對(duì)APL細(xì)胞體外增殖的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1．經(jīng)RT-PCR檢測(cè)，患者APL細(xì)胞擴(kuò)增出長(zhǎng)型(L-type)和短型(S-type)PML/PAR a融合基因。
　　 2．三氧化二砷一般在7～10天內(nèi)誘導(dǎo)明顯的外周血白細(xì)胞升高，平均第15天達(dá)到高峰，早幼粒比例下降，細(xì)胞分類以中幼粒樣細(xì)胞為主，較成熟粒細(xì)胞比例上升，白細(xì)胞升高持續(xù)12～15天，隨后

9、逐漸降低，緩解后恢復(fù)到正常水平。
　　 3．ELISA檢測(cè)結(jié)果表明，治療前APL患者血清中sICAM-1水平顯著高于對(duì)照組，治療后5-13天血清sICAM-1水平升高，第7天達(dá)到最高，此后逐漸下降，30天時(shí)接近正常水平。APL患者血清中粘附分子sVCAM-1水平明顯高于正常對(duì)照組，而治療后第7天達(dá)到最高，7-13天血清sVCAM-1水平高于治療前。治療13天后逐漸下降，30天后接近正常水平。As2O3對(duì)正常單個(gè)核細(xì)胞的粘附分子s

10、ICAM-1和sVCAM-1無(wú)明顯影響，對(duì)原代APL細(xì)胞分泌粘附分子sICAM-1和sVCAM-1影響不同，應(yīng)用As2O3后，原代APL細(xì)胞分泌粘附分子sICAM-1的水平升高不明顯，但sVCAM-1的分泌水平顯著升高。
　　 4．流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)果表明APL細(xì)胞經(jīng)過(guò)As2O3誘導(dǎo)后，粘附分子CD11b、CD54和CD106明顯升高，并且藥物達(dá)到高峰期后，粘附分子CD11b、CD54和CD106的表達(dá)也達(dá)到高峰。
　　

11、5．L-CFU隨著誘導(dǎo)分化治療呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)，緩解后L-CFU細(xì)胞幾乎不生長(zhǎng)，僅有少量集落形成。
　　 6．治療前sVCAM-1和sICAM-1的基因表達(dá)水平較低，治療后sVCAM-1和sICAM-1的基因表達(dá)均增強(qiáng)，并且隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)量上調(diào)。
　　 7．As2O3在體外能顯著抑制APL原代細(xì)胞的增殖，并且隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，抑制率升高。
　　 結(jié)論：
　　 三氧化二砷可誘導(dǎo)APL細(xì)胞由早幼粒細(xì)