RUNX3基因多態(tài)性與潰瘍性結腸炎相關性研究.pdf

1、潰瘍性結腸炎（UC）是一種病因不明的慢性腸道非特異性炎癥性疾病，發(fā)病機制不詳，一般認為是由包括感染在內的環(huán)境因素作用于具有多個基因缺陷的易感傾向個體，誘發(fā)異常免疫反應而導致疾病。西方國家發(fā)病率較高，亞洲發(fā)病率較低，但是近年來國內發(fā)病率逐年攀升。既往的流行病學研究顯示UC具有遺傳易感性，主要在不同人種的發(fā)病率、家族聚集現(xiàn)象、雙生子的研究中得到證實。近年來，基因連鎖分析確定了多個IBD易感基因的染色體座位，被稱為IBD1－IBD7；進而，發(fā)

2、現(xiàn)了多個UC的易感基因，并在不同人群中得到證實，例如SLC22A4和SLC22A5基因的多態(tài)性與CD和UC均有相關性，在意大利人群和英格蘭高加索人群中相繼得到重復。但是，UC是一個多基因遺傳疾病，其基因型與臨床表型之間存在紛繁復雜的關系；并且由于遺傳異質性的存在，特別是東西方人群之間的差異，很多西方的研究成果在東方無法得到重復，因此，尋找具有普遍性的IBD易感基因無可避免地成為目前研究的方向。
　　近年來RUNX結構域轉錄因子家族

3、成員與自身免疫性疾病的相關性開始引起關注，naturegenetics雜志相繼報道了與類風濕性關節(jié)炎、銀屑病及系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關的易感基因，這些基因SNP位點的共同特征是均位于Runx1蛋白的結合區(qū)，從中我們可以看出自身免疫紊亂的表象下面蘊含著共同的分子機制，Runxs蛋白家族成員在自身免疫性疾病的發(fā)病機制中可能均發(fā)揮著重要作用。RUNX3是Runt結構域轉錄因子家族成員，位于染色體1P36.1，對炎癥性腸病的特定易感人群的研究發(fā)現(xiàn)其染

4、色體1P36存在基因緊密連鎖和連鎖不平衡現(xiàn)象。另外，OriBrenner等人在研究中發(fā)現(xiàn)RUNX3基因敲除小鼠在4周齡時均自發(fā)發(fā)生潰瘍性結腸炎。這些均提示RUNX3在潰瘍性結腸炎的發(fā)病機制中可能具有重要作用，但是RUNX3及其直接調控的下游基因的基因多態(tài)性是否與潰瘍性結腸炎相關還不明確，本課題將對此進行探討。
　　目的：
　　1、明確RUNX3的表達與潰瘍性結腸炎是否相關；
　　2、篩選RUNX3調控的下游基因，預期從

5、中找出與潰瘍性結腸炎易感性密切相關基因；
　　3、檢測我國漢族人群中RUNX3及其下游基因的多態(tài)性與UC的相關性。
　　方法：
　　1、收集68例UC患者病變部位結腸粘膜組織及50例結腸癌患者手術后標本兩端的正常粘膜組織，用免疫組織化學方法檢測RUNX3在結腸粘膜組織中的表達情況。
　　2、通過染色質免疫共沉淀－啟動子芯片（CHIP-chip）技術篩選RUNX3調控的下游基因，從中找出與潰瘍性結腸炎易感性密切相關

6、基因；
　　3、采用PCR-SSP技術，對80例UC患者以及153例健康對照的RUNX3基因（rs2236851，C/T）、SLC22A4(rs3792876，C/T)及PPAR-γ(rs3892175，A/G)的遺傳多態(tài)性進行分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計使用SPSS軟件進行χ2檢驗分析。
　　結果：
　　1、利用免疫組化技術檢測了68例UC患者及50例正常粘膜組織中RUNX3的表達,發(fā)現(xiàn)RUNX3在潰瘍性結腸炎患者的腸粘膜中的表達

7、陽性率為76.5％(52/68)，對照組粘膜的陽性率為66.0％(33/50)，經過χ2檢驗進行比較，UC組與對照組間無顯著差別（P＞0.05），且RUNX3的表達與UC患者的性別、年齡、病情程度及病變部位無關。
　　2、利用染色質免疫共沉淀技術，得到SGC7901細胞中受到RUNX3直接調控的基因片段，純化后送基因芯片公司，經熒光探針的制備、芯片雜交、圖像采集和數(shù)據(jù)分析等步驟，以兩組信號強度的比值大于2作為判定標準，結果得到69

8、8個可能受到RUNX3直接調控的基因。其中PPAR-γ基因與UC的關系密切，成為我下一步研究關注對象之一。
　　3、RUNX3基因rs2236851C/T位點在我國人群中存在遺傳多態(tài)性，UC組T等位基因頻率為18.49％，明顯高于對照組（7.75％），可能與UC相關（P=0.001）。UC組RUNX3基因型分布為TT型0％，TC型36.99％，CC型63.01％；對照組為TT型0％，TC型15.49％，CC型84.51％；其差異具

9、有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。因此RUNX3的rs2236851位點可能與UC的遺傳易感性相關。SLC22A4基因（rs3792876C/T）及PPAR-γ基因（rs3892175A/G）在我國人群中存在多態(tài)性，但與UC的發(fā)病無顯著相關。
　　結論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)
　?、賀UNX3在潰瘍性結腸炎患者的腸粘膜中的表達與對照組相比無顯著差別，但RUNX3基因rs2236851C/T位點在我國人群中存在遺傳多態(tài)性，且與我國