RUNX3基因多態(tài)性與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性研究.pdf

1、潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種病因不明的慢性腸道非特異性炎癥性疾病，發(fā)病機(jī)制不詳，一般認(rèn)為是由包括感染在內(nèi)的環(huán)境因素作用于具有多個(gè)基因缺陷的易感傾向個(gè)體，誘發(fā)異常免疫反應(yīng)而導(dǎo)致疾病。西方國(guó)家發(fā)病率較高，亞洲發(fā)病率較低，但是近年來國(guó)內(nèi)發(fā)病率逐年攀升。既往的流行病學(xué)研究顯示UC具有遺傳易感性，主要在不同人種的發(fā)病率、家族聚集現(xiàn)象、雙生子的研究中得到證實(shí)。近年來，基因連鎖分析確定了多個(gè)IBD易感基因的染色體座位，被稱為IBD1－IBD7；進(jìn)而，發(fā)

2、現(xiàn)了多個(gè)UC的易感基因，并在不同人群中得到證實(shí)，例如SLC22A4和SLC22A5基因的多態(tài)性與CD和UC均有相關(guān)性，在意大利人群和英格蘭高加索人群中相繼得到重復(fù)。但是，UC是一個(gè)多基因遺傳疾病，其基因型與臨床表型之間存在紛繁復(fù)雜的關(guān)系；并且由于遺傳異質(zhì)性的存在，特別是東西方人群之間的差異，很多西方的研究成果在東方無法得到重復(fù)，因此，尋找具有普遍性的IBD易感基因無可避免地成為目前研究的方向。
　　近年來RUNX結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子家族

3、成員與自身免疫性疾病的相關(guān)性開始引起關(guān)注，naturegenetics雜志相繼報(bào)道了與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病及系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)的易感基因，這些基因SNP位點(diǎn)的共同特征是均位于Runx1蛋白的結(jié)合區(qū)，從中我們可以看出自身免疫紊亂的表象下面蘊(yùn)含著共同的分子機(jī)制，Runxs蛋白家族成員在自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中可能均發(fā)揮著重要作用。RUNX3是Runt結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子家族成員，位于染色體1P36.1，對(duì)炎癥性腸病的特定易感人群的研究發(fā)現(xiàn)其染

4、色體1P36存在基因緊密連鎖和連鎖不平衡現(xiàn)象。另外，OriBrenner等人在研究中發(fā)現(xiàn)RUNX3基因敲除小鼠在4周齡時(shí)均自發(fā)發(fā)生潰瘍性結(jié)腸炎。這些均提示RUNX3在潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制中可能具有重要作用，但是RUNX3及其直接調(diào)控的下游基因的基因多態(tài)性是否與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)還不明確，本課題將對(duì)此進(jìn)行探討。
　　目的：
　　1、明確RUNX3的表達(dá)與潰瘍性結(jié)腸炎是否相關(guān)；
　　2、篩選RUNX3調(diào)控的下游基因，預(yù)期從

5、中找出與潰瘍性結(jié)腸炎易感性密切相關(guān)基因；
　　3、檢測(cè)我國(guó)漢族人群中RUNX3及其下游基因的多態(tài)性與UC的相關(guān)性。
　　方法：
　　1、收集68例UC患者病變部位結(jié)腸粘膜組織及50例結(jié)腸癌患者手術(shù)后標(biāo)本兩端的正常粘膜組織，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)RUNX3在結(jié)腸粘膜組織中的表達(dá)情況。
　　2、通過染色質(zhì)免疫共沉淀－啟動(dòng)子芯片（CHIP-chip）技術(shù)篩選RUNX3調(diào)控的下游基因，從中找出與潰瘍性結(jié)腸炎易感性密切相關(guān)

6、基因；
　　3、采用PCR-SSP技術(shù)，對(duì)80例UC患者以及153例健康對(duì)照的RUNX3基因（rs2236851，C/T）、SLC22A4(rs3792876，C/T)及PPAR-γ(rs3892175，A/G)的遺傳多態(tài)性進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用SPSS軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)分析。
　　結(jié)果：
　　1、利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了68例UC患者及50例正常粘膜組織中RUNX3的表達(dá),發(fā)現(xiàn)RUNX3在潰瘍性結(jié)腸炎患者的腸粘膜中的表達(dá)

7、陽性率為76.5％(52/68)，對(duì)照組粘膜的陽性率為66.0％(33/50)，經(jīng)過χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較，UC組與對(duì)照組間無顯著差別（P＞0.05），且RUNX3的表達(dá)與UC患者的性別、年齡、病情程度及病變部位無關(guān)。
　　2、利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)，得到SGC7901細(xì)胞中受到RUNX3直接調(diào)控的基因片段，純化后送基因芯片公司，經(jīng)熒光探針的制備、芯片雜交、圖像采集和數(shù)據(jù)分析等步驟，以兩組信號(hào)強(qiáng)度的比值大于2作為判定標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果得到69

8、8個(gè)可能受到RUNX3直接調(diào)控的基因。其中PPAR-γ基因與UC的關(guān)系密切，成為我下一步研究關(guān)注對(duì)象之一。
　　3、RUNX3基因rs2236851C/T位點(diǎn)在我國(guó)人群中存在遺傳多態(tài)性，UC組T等位基因頻率為18.49％，明顯高于對(duì)照組（7.75％），可能與UC相關(guān)（P=0.001）。UC組RUNX3基因型分布為TT型0％，TC型36.99％，CC型63.01％；對(duì)照組為TT型0％，TC型15.49％，CC型84.51％；其差異具

9、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。因此RUNX3的rs2236851位點(diǎn)可能與UC的遺傳易感性相關(guān)。SLC22A4基因（rs3792876C/T）及PPAR-γ基因（rs3892175A/G）在我國(guó)人群中存在多態(tài)性，但與UC的發(fā)病無顯著相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)
　　①RUNX3在潰瘍性結(jié)腸炎患者的腸粘膜中的表達(dá)與對(duì)照組相比無顯著差別，但RUNX3基因rs2236851C/T位點(diǎn)在我國(guó)人群中存在遺傳多態(tài)性，且與我國(guó)