IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、anti-IGF-IR對人腎上腺皮質(zhì)癌SW-13細(xì)胞株生長及凋亡的調(diào)控.pdf

1、研究目的：腎上腺皮質(zhì)癌是一種罕見且惡性程度極高的惡性腫瘤，其發(fā)病率約1/100萬，發(fā)病機(jī)理尚未明確。大約2/3的患者發(fā)現(xiàn)腫瘤時已局部侵潤或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，臨床治療效果差，預(yù)后差。IGFs是近年來腫瘤研究一大熱點，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、進(jìn)展及預(yù)后有密切關(guān)系。本研究旨在評價腎上腺皮質(zhì)癌與IGFs的關(guān)系，冀希望通過本研究達(dá)到以下目的：1、通過對SW-13細(xì)胞株體外培養(yǎng)了解SW-13細(xì)胞株的生物學(xué)行為及生物學(xué)特性；2、通過IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ及a

2、nti-IGF-IR對SW-13細(xì)胞體外培養(yǎng)的干預(yù)，探討其對SW-13細(xì)胞株生長及凋亡的調(diào)控。3、探討以IGFs為新的治療靶點用于治療腎上腺皮質(zhì)癌的可能。 材料與方法：1、材料：蘇州凈化設(shè)備廠產(chǎn)SA-ⅡA生物安全臺；Napco5410型CO<,2>細(xì)胞培養(yǎng)箱；biocell產(chǎn)ht2型酶標(biāo)儀；尼康E-600光學(xué)顯微鏡；日立H-600透視電鏡；HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)；Sigma公司提供L-15培養(yǎng)基干粉、分

3、裝噻嘩氮藍(lán)(MTT)、分裝二甲亞砜(DMSO)、胰蛋白酶；杭州四季青生物制品有限公司提供胎牛血清。SW-13細(xì)胞株由上海中科院細(xì)胞庫提供。R&D公司提供人重組Ⅰ型胰島素樣生長因子(rhlGF-Ⅰ)、人重組Ⅱ型胰島素樣生長因子(rhIGF-Ⅱ)、人胰島素樣生長因子Ⅰ型受體抗體(anti-IGF-IR)：Roche公司提供原位凋亡檢測試劑盒。2、SW-13細(xì)胞株進(jìn)行體外培養(yǎng)，MTT法檢測其生長曲線，電鏡下、光鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察。3、采用

4、MTT法描繪不同濃度胰島素樣生長因子及其Ⅰ型受體抗體作用后SW-13細(xì)胞株體外培養(yǎng)生長的促進(jìn)及抑制的效應(yīng)．濃度曲線，并比較不同濃度的胰島素樣生長因子和其Ⅰ型受體抗體組及單一胰島素樣生長因子或其Ⅰ型受體抗體組與陰性對照組之間差異。4、原位凋亡(TLINEL)法檢測胰島素樣生長因子及其Ⅰ型受體抗體單獨(dú)或聯(lián)合作用于SW-13細(xì)胞后細(xì)胞凋亡情況，同時觀察細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量變化。 結(jié)果：1、細(xì)胞需在37℃，無CO<,2>，偏堿性環(huán)境下培養(yǎng)，6

5、-8h完全貼壁，2d左右進(jìn)入對數(shù)生長期。細(xì)胞生物學(xué)性狀穩(wěn)定。2、胰島素樣生長因子能明顯促進(jìn)SW-13細(xì)胞增殖，其作用效果與作用濃度在一定濃度范圍內(nèi)呈正相關(guān)(P<0.05)；而胰島素樣生長因子Ⅰ型受體抗體能抑制胰島素樣生長因子對SW-13細(xì)胞刺激作用，并且對SW-13細(xì)胞的增殖亦有直接抑制作用(P<0.05)。3、胰島素樣生長因子能明顯抑制SW-13細(xì)胞凋亡，而胰島素樣生長因子Ⅰ型受體抗體能促進(jìn)SW-13細(xì)胞凋亡，而胰島素樣生長因子主要通