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文檔簡介
1、本試驗(yàn)以六種動物(雞、鵝、狗、兔、豬、山羊,各4個(gè)重復(fù))為研究對象,通過細(xì)胞凝集和吸附測定兩種方法,研究了純化大豆凝集素(SBA)對不同種動物的影響。凝集反應(yīng)試驗(yàn)采用吸光法測定了SBA與動物未經(jīng)修飾的紅細(xì)胞、胰蛋白酶修飾的紅細(xì)胞和脾臟淋巴細(xì)胞的凝集活性;吸附試驗(yàn)采用ELLSA法測定了SBA與小腸粘膜和完整小腸組織的結(jié)合能力。 試驗(yàn)中所用的純化SBA用交聯(lián)瓜爾多糖凝膠法進(jìn)行分離提純而獲得,在細(xì)胞凝集試驗(yàn)中,以2倍稀釋法設(shè)定SBA的
2、濃度梯度,在可發(fā)生凝集作用的有效時(shí)間后,測定上清液620nm處的吸光值;在吸附測定試驗(yàn)中,所用ELLSA法是直接以SBA為抗體,用辣根過氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記,標(biāo)記抗體與小腸樣品反應(yīng)后,通過測定酶活性(OD495nm)來間接反應(yīng)腸黏膜與SBA的結(jié)合能力,試驗(yàn)設(shè)九個(gè)SBA濃度梯度。 SBA與未經(jīng)修飾紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)表明:兔對SBA極為敏感,豬次之,山羊只在特定濃度區(qū)間發(fā)生凝聚反應(yīng),雞、鵝和狗未發(fā)生凝集反應(yīng)。對兔來說,SBA稀釋度從2倍到
3、64倍這個(gè)區(qū)間,其OD值幾乎為零,發(fā)生強(qiáng)凝集反應(yīng);稀釋到1024倍,SBA濃度為1.5×10-3mg/ml時(shí),紅細(xì)胞懸浮液的OD值與空白對照管基本相同,無凝集現(xiàn)象發(fā)生,此時(shí)可能達(dá)到了臨界濃度。對豬來說,SBA稀釋度在16倍前,發(fā)生強(qiáng)凝集反應(yīng);稀釋到128倍,SBA濃度為1.25×10-2時(shí),無凝集反應(yīng)發(fā)生。羊的情況較特殊,只在SBA被稀釋8倍到64倍之間時(shí)發(fā)生弱凝集反應(yīng),其它濃度時(shí)無凝集現(xiàn)象。 SBA與胰酶修飾紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)表
4、明:紅細(xì)胞經(jīng)修飾后,某些動物對SBA更為敏感。修飾后,兔紅細(xì)胞在SBA稀釋到4096倍才無凝集反應(yīng),臨界濃度可能為3.93×10-4mg/ml,敏感程度提高了4倍;豬的紅細(xì)胞在SBA稀釋到1024倍時(shí),無凝集反應(yīng),臨界濃度為1.5×10-3mg/ml,敏感程度提高了6-8倍;雞的紅細(xì)胞經(jīng)胰酶修飾前,無凝集作用發(fā)生,而修飾后,在SBA稀釋到2倍至4倍時(shí)發(fā)生弱凝集反應(yīng);山羊的紅細(xì)胞經(jīng)胰酶修飾以后,反而無凝集作用發(fā)生,但不能斷言其無SBA結(jié)合
5、位點(diǎn),可能是因?yàn)樯窖虻募t細(xì)胞不適合被胰酶修;鵝、狗紅細(xì)胞依然無凝集反應(yīng)。 SBA與脾淋巴細(xì)胞的凝集反應(yīng)表明:六種動物的淋巴細(xì)胞均不同程度地與SBA發(fā)生了凝集反應(yīng)。兔最敏感,最高稀釋度為64倍,臨界濃度為0.025mg/ml;鵝、狗、雞最高稀釋度為16倍,臨界濃度為0.1mg/ml;豬的最高稀釋度為8倍,臨界濃度為0.2mg/ml;羊的最高稀釋度為4倍,臨界濃度為0.4mg/ml。 ELLSA法吸附測定結(jié)果表明:以10倍稀
6、釋時(shí),不同種屬動物間的離散性最高,粘膜樣本F值為50.02,小腸組織樣本F值為74.88,說明SBA的濃度越高種間差異越明顯。對腸粘膜來說,SBA稀釋10倍時(shí),結(jié)合程度排序?yàn)殡u、兔、狗、鵝、豬、山羊。雞和兔與其它動物差異顯著(P<0.05),二者之間差異不顯著(P>0.05);狗與其它動物差異顯著(P<0.05);鵝、豬、山羊與其它動物差異顯著(P<0.05),三者之間差異不顯著(P>0.05)。到30000倍時(shí),除雞、羊外,其它四種動
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