胡頹子葉綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)研究.pdf

1、目的：本課題對(duì)不同產(chǎn)地胡頹子葉進(jìn)行綜合質(zhì)量分析研究：對(duì)胡頹子葉中銀鍛苷、槲皮素和山奈酚三個(gè)指標(biāo)性化學(xué)成分進(jìn)行含量測(cè)定，并比較不同產(chǎn)地胡頹子葉中三個(gè)指標(biāo)性化學(xué)成分的差異，利用現(xiàn)代分析儀器對(duì)胡頹子葉進(jìn)行綜合的檢測(cè)分析，為胡頹子葉藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。建立胡頹子葉中銀鍛苷的最佳提取工藝，建立 HPLC法和UPLC法同時(shí)測(cè)定胡頹子葉中槲皮素和山奈酚的含量的方法，并且對(duì)HPLC法和UPLC法測(cè)定的結(jié)果之間進(jìn)行了比較。建立胡頹子葉的HPLC指紋圖譜

2、，以此對(duì)胡頹子葉的整體質(zhì)量?jī)?yōu)劣進(jìn)行評(píng)價(jià)。測(cè)定胡頹子葉中的重金屬和微量元素的含量，進(jìn)一步評(píng)價(jià)胡頹子葉的質(zhì)量。對(duì)胡頹子葉進(jìn)行一般質(zhì)量研究，綜合評(píng)價(jià)胡頹子葉的質(zhì)量。
　　方法：采用HPLC法對(duì)12個(gè)產(chǎn)地胡頹子葉中銀鍛苷、槲皮素和山奈酚這三個(gè)指標(biāo)性化合物進(jìn)行含量測(cè)定，制定了胡頹子葉中銀鍛苷、槲皮素和山奈酚的定量方法，考察了胡頹子葉中銀鍛苷的最佳提取工藝，建立12批不同產(chǎn)地胡頹子葉的HPLC指紋圖譜，通過(guò)對(duì)其進(jìn)行聚類分析和相似度分析，建立胡

3、頹子葉的HPLC指紋圖譜及其質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。對(duì)胡頹子葉進(jìn)行一般質(zhì)量研究，包括水分、浸出物、灰分、酸不溶性灰分以及采用原子吸收分光光度法（AAS法）對(duì)不同產(chǎn)地胡頹子葉的重金屬（Pb、Cd、As、Hg、Cu）和一般微量元素（Fe、Mn、Cr、Mg、K、Zn）進(jìn)行含量測(cè)定。通過(guò)對(duì)胡頹子葉進(jìn)行以上各方面的研究，制定出全面、科學(xué)、合理的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。
　　結(jié)果：通過(guò)研究確定了胡頹子葉指標(biāo)性成分的含量測(cè)定方法，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定了胡

4、頹子葉中銀鍛苷提取的最佳工藝為：80％甲醇作為溶劑，體積為50mL，水浴回流提取時(shí)間為1.5h，水浴溫度為85℃，回流提取兩次。銀鍛苷的HPLC色譜條件為：ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl Analytical(4.6 mm×250 mm,5μm)；流動(dòng)相：0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脫系統(tǒng)如下：0～5 min,10%～15%B;5～15 min,15%～20%B;15～20 min,20%～22%B;

5、20～25min,22%～23%B;25～30 min,23%～24%B;30～35 min,24%～26%B;35～40 min,26%～30%B;40～55 min,30%～45%B;55～60 min,45%～45%B；柱溫30℃；流速1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)315 nm；進(jìn)樣量20μL。在0.005～0.10mg·mL-1范圍內(nèi)銀鍛苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系（r=0.9998），加樣平均回收率為99

6、.14%，RSD為1.33%（n=6）。通過(guò)正交試驗(yàn)，確定了槲皮素和山奈酚的最佳提取工藝：25%鹽酸-乙醇（1:4）100mL作為溶劑，水浴回流提取1次，時(shí)間為1.5h。槲皮素和山奈酚的色譜條件為：ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl Analytical(4.6 mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相為0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脫系統(tǒng)如下：0～5min,10%～15%B;5～10min,15%～20%B;1

7、0～15min,20%～25%B;15～20min,25%～28%B;20～25min,28%～28%B;25～30min,28%～30%B;30～35min,30%～40%B；柱溫30℃；流速1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)366nm；進(jìn)樣量10μL。按上述色譜條件檢測(cè)對(duì)照品溶液與供試品溶液，結(jié)果供試品溶液中槲皮素和山柰酚的色譜峰與其他色譜峰均分離良好，峰形對(duì)稱。槲皮素在2.2～44μg·mL-1(r=0.9995)、山柰酚在3.9

8、2～98μg·mL-1(r=0.9999)范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為98.81%、99.37%，RSD值為1.69%（n=6）、1.11%（n=6）。胡頹子葉中槲皮素和山柰酚的含量范圍分別為0.3795～2.4628mg·g-1、2.9820～8.0797 mg·g-1。建立了不同產(chǎn)地胡頹子葉HPLC指紋圖譜，并進(jìn)行了方法學(xué)考察。通過(guò)對(duì)胡頹子葉HPLC指紋圖譜的分析找出其特有指紋特征并進(jìn)行分析，如相似度分析和

9、聚類分析，胡頹子葉HPLC指紋圖譜確認(rèn)了16個(gè)共有峰，確認(rèn)了蘆丁、銀鍛苷和山奈酚的色譜峰，HPLC指紋圖譜的相似度達(dá)到0.8以上。建立胡頹子葉指紋圖譜及其質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。采用原子吸收分光光度法對(duì)12批胡頹子葉的重金屬和一般微量元素進(jìn)行了含量測(cè)定，各個(gè)產(chǎn)地均含有豐富的微量元素，但各個(gè)產(chǎn)地之間的含量存在差異。以《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》為重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)，12批不同產(chǎn)地的胡頹子葉中重金屬均未超標(biāo)。根據(jù)2010版《中國(guó)藥典》，對(duì)胡頹子葉

10、進(jìn)行一般質(zhì)量研究和雜質(zhì)檢查，包括水分測(cè)定、浸出物測(cè)定、總灰分、酸不溶性灰分含量均符合藥材規(guī)定，浸出物（95%醇溶性浸出物）含量在4.10%-7.15%之間。
　　結(jié)論：本課題通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地胡頹子葉進(jìn)行了綜合質(zhì)量分析研究，建立了胡頹子葉的多指標(biāo)性化學(xué)成分的質(zhì)量控制方法；建立不同產(chǎn)地胡頹子葉HPLC指紋圖譜以及質(zhì)量評(píng)價(jià)方法；對(duì)胡頹子葉進(jìn)行一般質(zhì)量研究和雜質(zhì)檢查，包括水分、總灰分、酸不溶性灰分以及重金屬和其他一般微量元素的含量的測(cè)定，綜