胡頹子葉綜合質量評價研究.pdf

1、目的：本課題對不同產地胡頹子葉進行綜合質量分析研究：對胡頹子葉中銀鍛苷、槲皮素和山奈酚三個指標性化學成分進行含量測定，并比較不同產地胡頹子葉中三個指標性化學成分的差異，利用現(xiàn)代分析儀器對胡頹子葉進行綜合的檢測分析，為胡頹子葉藥材質量評價提供參考。建立胡頹子葉中銀鍛苷的最佳提取工藝，建立 HPLC法和UPLC法同時測定胡頹子葉中槲皮素和山奈酚的含量的方法，并且對HPLC法和UPLC法測定的結果之間進行了比較。建立胡頹子葉的HPLC指紋圖譜

2、，以此對胡頹子葉的整體質量優(yōu)劣進行評價。測定胡頹子葉中的重金屬和微量元素的含量，進一步評價胡頹子葉的質量。對胡頹子葉進行一般質量研究，綜合評價胡頹子葉的質量。
　　方法：采用HPLC法對12個產地胡頹子葉中銀鍛苷、槲皮素和山奈酚這三個指標性化合物進行含量測定，制定了胡頹子葉中銀鍛苷、槲皮素和山奈酚的定量方法，考察了胡頹子葉中銀鍛苷的最佳提取工藝，建立12批不同產地胡頹子葉的HPLC指紋圖譜，通過對其進行聚類分析和相似度分析，建立胡

3、頹子葉的HPLC指紋圖譜及其質量評價方法。對胡頹子葉進行一般質量研究，包括水分、浸出物、灰分、酸不溶性灰分以及采用原子吸收分光光度法（AAS法）對不同產地胡頹子葉的重金屬（Pb、Cd、As、Hg、Cu）和一般微量元素（Fe、Mn、Cr、Mg、K、Zn）進行含量測定。通過對胡頹子葉進行以上各方面的研究，制定出全面、科學、合理的質量評價方法。
　　結果：通過研究確定了胡頹子葉指標性成分的含量測定方法，通過單因素試驗和正交試驗，確定了胡

4、頹子葉中銀鍛苷提取的最佳工藝為：80％甲醇作為溶劑，體積為50mL，水浴回流提取時間為1.5h，水浴溫度為85℃，回流提取兩次。銀鍛苷的HPLC色譜條件為：ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl Analytical(4.6 mm×250 mm,5μm)；流動相：0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脫系統(tǒng)如下：0～5 min,10%～15%B;5～15 min,15%～20%B;15～20 min,20%～22%B;

5、20～25min,22%～23%B;25～30 min,23%～24%B;30～35 min,24%～26%B;35～40 min,26%～30%B;40～55 min,30%～45%B;55～60 min,45%～45%B；柱溫30℃；流速1.0 mL·min-1；檢測波長315 nm；進樣量20μL。在0.005～0.10mg·mL-1范圍內銀鍛苷標準品溶液濃度與峰面積積分值呈良好的線性關系（r=0.9998），加樣平均回收率為99

6、.14%，RSD為1.33%（n=6）。通過正交試驗，確定了槲皮素和山奈酚的最佳提取工藝：25%鹽酸-乙醇（1:4）100mL作為溶劑，水浴回流提取1次，時間為1.5h。槲皮素和山奈酚的色譜條件為：ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl Analytical(4.6 mm×250mm,5μm)；流動相為0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脫系統(tǒng)如下：0～5min,10%～15%B;5～10min,15%～20%B;1

7、0～15min,20%～25%B;15～20min,25%～28%B;20～25min,28%～28%B;25～30min,28%～30%B;30～35min,30%～40%B；柱溫30℃；流速1.0 mL·min-1；檢測波長366nm；進樣量10μL。按上述色譜條件檢測對照品溶液與供試品溶液，結果供試品溶液中槲皮素和山柰酚的色譜峰與其他色譜峰均分離良好，峰形對稱。槲皮素在2.2～44μg·mL-1(r=0.9995)、山柰酚在3.9

8、2～98μg·mL-1(r=0.9999)范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系，平均加樣回收率為98.81%、99.37%，RSD值為1.69%（n=6）、1.11%（n=6）。胡頹子葉中槲皮素和山柰酚的含量范圍分別為0.3795～2.4628mg·g-1、2.9820～8.0797 mg·g-1。建立了不同產地胡頹子葉HPLC指紋圖譜，并進行了方法學考察。通過對胡頹子葉HPLC指紋圖譜的分析找出其特有指紋特征并進行分析，如相似度分析和

9、聚類分析，胡頹子葉HPLC指紋圖譜確認了16個共有峰，確認了蘆丁、銀鍛苷和山奈酚的色譜峰，HPLC指紋圖譜的相似度達到0.8以上。建立胡頹子葉指紋圖譜及其質量評價方法。采用原子吸收分光光度法對12批胡頹子葉的重金屬和一般微量元素進行了含量測定，各個產地均含有豐富的微量元素，但各個產地之間的含量存在差異。以《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》為重金屬限量標準，12批不同產地的胡頹子葉中重金屬均未超標。根據(jù)2010版《中國藥典》，對胡頹子葉

10、進行一般質量研究和雜質檢查，包括水分測定、浸出物測定、總灰分、酸不溶性灰分含量均符合藥材規(guī)定，浸出物（95%醇溶性浸出物）含量在4.10%-7.15%之間。
　　結論：本課題通過對不同產地胡頹子葉進行了綜合質量分析研究，建立了胡頹子葉的多指標性化學成分的質量控制方法；建立不同產地胡頹子葉HPLC指紋圖譜以及質量評價方法；對胡頹子葉進行一般質量研究和雜質檢查，包括水分、總灰分、酸不溶性灰分以及重金屬和其他一般微量元素的含量的測定，綜