糖尿病性胃輕癱大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞鉀通道的變化.pdf

1、胃Cajal間質(zhì)細(xì)胞（interstitial cell of Cajal，ICC）與胃腸平滑肌和腸神經(jīng)系統(tǒng)（Enteric Never System，ENS）關(guān)系密切，其有三大功能：為胃腸道慢波電位的起搏細(xì)胞，產(chǎn)生并傳導(dǎo)慢波活動(dòng)至胃腸平滑??；推進(jìn)電活動(dòng)的傳播；調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)。這些功能與鈣、鉀、鈉及氯等眾多離子有關(guān)，特別是鉀離子。
　　 因此，本文從電生理和分子生物學(xué)兩方面，研究糖尿病性胃輕癱大鼠ICC外向鉀電流和內(nèi)向整流鉀電流的

2、變化及胃體和胃竇部位Kv1.1和Kir2.1 mRNA水平的變化，為其發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。
　　 第一部分、糖尿病性胃輕癱大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞外向鉀電流和內(nèi)整流鉀電流的變化
　　 目的：觀察糖尿病性胃輕癱大鼠ICC外向鉀電流和內(nèi)整流鉀電流的變化。
　　 方法：采用一次大劑量腹腔注射鏈脲左菌素（STZ）制備大鼠糖尿病模型，原代培養(yǎng)正常和糖尿病性胃輕癱大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞（5～7天），運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，在電壓鉗

3、制模式下記錄單個(gè)Cajal間質(zhì)細(xì)胞的外向電流（outward current）和內(nèi)向整流鉀電流（inward rectifier potassium current，Ikir）的變化。
　　 結(jié)果：與正常組相比，糖尿病性胃輕癱大鼠I-V曲線上移，各測(cè)試電壓下的電流均大于正常水平，+20 mV時(shí)，電流值由641.7±59.58 pA（正常組）升至1345.2±151.82 pA，為正常電流值的2.096倍。模型組的穩(wěn)態(tài)激活曲線與正

4、常組相比，V1/2向左值方向平均移動(dòng)約15 mV，顯著小于對(duì)照組(P<0.05)。
　　 糖尿病性胃輕癱大鼠ICC內(nèi)向整流鉀電流幅值較正常大鼠有所減少，其翻轉(zhuǎn)電位由-88 mV變?yōu)?105 mV。
　　 第二部分、糖尿病性胃輕癱大鼠Kv1.1（電壓依賴性鉀通道）和Kir2.1（內(nèi)向整流鉀通道）mRNA表達(dá)變化
　　 目的：研究患糖尿病4周、8周、12周大鼠，胃體胃竇部位Kv1.1（電壓依賴性鉀通道）和Kir2.1

5、（內(nèi)向整流鉀通道）mRNA表達(dá)變化。
　　 方法：運(yùn)用半定量逆轉(zhuǎn)綠聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)Kv1.1（voltage-depent potassium channel）和Kir（inward rectifier potassium channel）的mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：患糖尿病4周，8周，12周大鼠胃體和胃竇

6、部位的Kir2.1 mRNA表達(dá)量與正常組（胃體：1.5892±0.1752；胃竇：1.9419±0.0280）比較呈時(shí)間依賴性的顯著降低，胃體Kir2.1/β-actin灰度比值依次降為：1.4610±0.1121，0.8576±0.1594，0.5312±0.1886；胃竇灰度比值依次降為：1.9419±0.0280，0.6687±0.2262，0.5235±0.2539。
　　 正常組胃體和胃竇部位Kv1.1/β-acti

7、n灰度比值分別為1.0566±0.1903，1.1473±0.1074。糖尿病4周，8周，12周的大鼠胃體灰度比值分別為：1.0962±0.2194，1.1116±0.0498，1.1902±0.2800；胃竇：1.1277±0.0038，1.2291±0.3164，1.2310±0.3689。各模型組與正常組比較差異無(wú)顯著性意義。
　　 結(jié)論：1）結(jié)果顯示糖尿病胃輕癱ICC外向鉀電流不但增大，且更易激活；內(nèi)向整流鉀電流減少且翻

8、轉(zhuǎn)電位由-88 mV變?yōu)?105 mV。表明糖尿病胃輕癱時(shí)ICC興奮性降低并有助于負(fù)電位的維持；2）RT-PCR結(jié)果顯示：與正常組比較患糖尿病4周，8周，12周的大鼠胃體胃竇部位Kir2.1 mRNA的表達(dá)量分別呈時(shí)間依賴性的降低，提示糖尿病胃輕癱時(shí)胃體和胃竇Kir 2.1 mRNA 水平降低，其細(xì)胞通道數(shù)目可能減少。
　　 總之，ICC外向鉀電流的增加和內(nèi)向整流鉀電流的減少及胃體和胃竇Kir2.1 mRNA水平的降低可能是糖尿