糖尿病大鼠心室肌細(xì)胞鉀通道的研究.pdf

1、目的：研究糖尿病大鼠心室肌細(xì)胞鉀通道的改變及其分子機(jī)制。 方法: 1.取體重150～200g雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，單次腹腔注射10mg/mlSTZ檸檬酸溶液(65mg/kg)，對(duì)照組(n=15)單次腹腔注射等體積0.1mol/L檸檬酸緩沖液(pH=4.5)。注射后第3天剪尾靜脈測(cè)血糖，以>16.67mmol/L視為糖尿病模型成功(n=14)。 2.采用酶解法分離獲得單個(gè)心室肌細(xì)胞，應(yīng)用膜片

2、鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)記錄兩組大鼠心室肌細(xì)胞膜電容(C<,m>)和瞬間外向鉀流(I<,to>)、穩(wěn)態(tài)外向鉀流(I<,ss>)及內(nèi)向整流性鉀流(I<,k1>)。電流大小以電流密度(pA/pF)表示。將每一鉗制電壓下的最大電流密度繪制成電流密度-電壓(I-V)曲線。 3.采用Trizol-氯仿-異丙醇法提取兩組大鼠心室肌總mRAN，取總mRNA做逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA，然后進(jìn)行PCR特異性擴(kuò)增I<,to>通道α亞單位編碼基因Kvl.4、Kv4

3、.2和Kv4.3。最后將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳和圖像掃描，分別測(cè)目的基因和內(nèi)參(β-actin)條帶的灰度(OD)值，用兩者的OD比值代表目的基因的相對(duì)表達(dá)含量。 結(jié)果: 1.糖尿病組大鼠出現(xiàn)典型的糖尿病癥狀，體重比對(duì)照組顯著下降，分別為(165.93±8.99)g(n=14)和(227.27±7.40)g(n=15)(P<0.01)；血糖水平穩(wěn)定維持在20mmol/L左右，顯著高于對(duì)照組(5.47±0.31)mmol/L(P

4、<0.01)。 2.①糖尿病組和對(duì)照組大鼠心室肌細(xì)胞膜電容無(wú)顯著差異，分別為(108.24±25.00)pF(n=29)和(118.18±27.16)pF(n=9)；②糖尿病組大鼠心室肌細(xì)胞+70mv時(shí)I<,to>密度[(18.91±3.27)pA/pF(n=29)]較對(duì)照組[(30.59±3.84)pA/pF(n=9)]顯著下降(P<0.01)；③糖尿病組I<,ss>密度較對(duì)照組下降21％，分別為(4.45±1.79)pA/p

5、F(n=29)和(5.64±2.26)pA/pF(n=9)，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；④I<,ki>具有明顯的內(nèi)向整流性特征，糖尿病組和對(duì)照組I<,kl>密度分別為(16.75±1.51)pA/pF(n=29)和(15.79±1.67)pA/pF(n=9)，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.糖尿病組大鼠心室肌I<,to>通道α亞單位編碼基因Kv4.2、Kv4.3的mRNA表達(dá)較對(duì)照組顯著下降，分別下降56.88％和46.57％，而Kvl.4 m