貴陽市500例兒童人偏肺病毒感染特征調(diào)查研究.pdf

1、第一部分熒光定量PCR檢測兒童NPA人偏肺病毒方法的建立
　　目的：觀察比較實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time PCR）方法與普通反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）方法檢測人偏肺病毒(human Metapneumovirus，hMPV)的特異性、靈敏性，以建立能準(zhǔn)確定量檢測兒童深部鼻咽吸取物（nasopharyngeal a

2、spirate，NPA）hMPV感染的分子生物學(xué)檢測方法。
　　方法：用DNAstar軟件分析hMPV原型株及亞型的基因片段，找出相對(duì)保守的基因位點(diǎn)，根據(jù)保守基因位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)出針對(duì)hMPV F基因的引物及探針，建立檢測hMPV F基因的Real-time PCR方法，并同時(shí)根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則設(shè)計(jì)RT-PCR的引物，對(duì)兩種方法的特異性、靈敏性、重復(fù)性以及是否實(shí)用于兒童深部鼻咽吸取物hMPV感染的檢測等指標(biāo)進(jìn)行比較評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果

3、：Real-time PCR方法能夠特異性的的檢測兒童深部鼻咽吸取物hMPV，并且能進(jìn)行定量分析，定量的敏感度可達(dá)到102拷貝，比較Real-time PCR方法與RT-PCR方法，其檢出率分別為16％及9.8%，相對(duì)于Real-time PCR，RT-PCR的靈敏度及特異度分別為31.3%及94.3%。
　　結(jié)論： Real-time PCR檢測hMPV敏感性明顯高于RT-PCR方法，為臨床開展兒童深部鼻咽吸取物hMPV感染的定

4、量檢測及貴陽地區(qū)hMPV感染流行病學(xué)調(diào)查建立了有效的分子生物學(xué)檢測方法。
　　第二部分貴陽市500例兒童人偏肺病毒感染特征調(diào)查研究
　　目的：采用已建立的Real-time PCR方法檢測貴陽地區(qū)兒童急性下呼吸道感染（Acute lower respiratory tract infections，ALRTI）住院患兒人偏肺病毒(human Metapneumovirus，hMPV)感染情況，并對(duì)hMPV感染的流行病學(xué)特點(diǎn)和

5、臨床特征進(jìn)行總結(jié)分析。
　　方法：收集2014年1月～2014年12月全年間500例ALRTI患兒深部鼻咽吸取物（nasopharyngeal aspirate，NPA）和2ml靜脈血標(biāo)本，Real-time PCR方法對(duì)NPA進(jìn)行hMPV F基因檢測，陽性標(biāo)本擴(kuò)增產(chǎn)物行核苷酸序列測定，同時(shí)取NPA進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，并采用間接免疫熒光方法對(duì)血標(biāo)本進(jìn)行7種常見呼吸道病毒病原檢測，收集病例臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：500例N

6、PA標(biāo)本中共檢測到80例實(shí)時(shí)Real-time PCR陽性,陽性率16%，陽性標(biāo)本測序結(jié)果與GeneBank中hMPV同源性達(dá)91%-99%。80例hMPV陽性患兒中,感染年齡0～6歲，其中1歲以下感染率最高，6歲以上合并基礎(chǔ)疾病患兒也易受hMPV感染；hMPV流行特點(diǎn)為全年散發(fā),發(fā)病高峰出現(xiàn)在2/3/5/6/12月；hMPV感染后喘息癥狀發(fā)生率較高；hMPV可協(xié)同感染其它呼吸道病原體,當(dāng)hMPV患兒協(xié)同其他病原感染時(shí)，部分病例病情較重