脫水穿心蓮內(nèi)酯對糖尿病大鼠急性心肌缺血的保護作用及其機制分析.pdf

1、【目的】①探討糖尿病大鼠并發(fā)急性心肌缺血時超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和心臟組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、核因子-?Bp65(NF-?Bp65)及胰腺組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的變化，及其對大鼠血糖、血清肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）和胰腺、心臟組織形態(tài)學改變的影響。②探討14-脫羥-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯防治糖尿病急性心肌缺血的作用機制。
　　【方法】將52只健康雄性SD大鼠，適應(yīng)性

2、喂養(yǎng)一周。禁食12h測空腹血糖，選空腹血糖正常的50只大鼠為實驗動物，其中的10只作為正常對照組，腹腔注射1～2ml的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。其余40只大鼠均按55mg·kg-1一次性腹腔注射1％鏈脲佐菌素（STZ）（用pH＝4.5，0.1mol·L-1檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液配置），5d后斷尾取血測空腹血糖，＞16.7mmol·L-1者為糖尿病模型成立。然后將成膜的36只大鼠隨機分為模型組、高劑量組、低劑量組，每組12只。成膜后第二天，

3、高劑量組給予14-脫羥-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯200mg·kg-1·d-1，低劑量組給予14-脫羥-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯100mg·kg-1·d-1，連續(xù)給藥14d。正常組和模型組每天腹腔注射5～6ml生理鹽水。各實驗組動物在給藥結(jié)束的第二天用10%水合氯醛麻醉，連接Ⅱ?qū)?lián)心電圖，按5mg·kg-1腹腔注射異丙腎上腺素（ISO），記錄注射ISO前5min和后5min、10min、30min、60min的心電圖，根據(jù)J點的偏

4、移判斷心肌缺血。于心電圖結(jié)束后，斷尾采血測血糖，腹主動脈取血，胰腺和心臟取材。離心收集血清，檢測血清中CK、LDH的變化來反應(yīng)心肌的損傷程度，測定血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的變化來反應(yīng)機體自由基損傷程度。HE染色觀察胰腺和心臟組織的病理改變情況；免疫組織化學觀察TNF-α在胰腺和心臟中的表達及分布；western-blot檢測心肌NF-?Bp65在心臟中表達量的變化。
　　【結(jié)果】1、血清指標的檢測模型組與正

5、常對照組相比，血糖、CK、LDH、MDA明顯升高（P﹤0.05），SOD活性明顯下降（P﹤0.05）。藥物干預(yù)組與模型組相比，血糖、CK、LDH、MDA明顯下降（P﹤0.05），SOD活性明顯增高（P﹤0.05），而高劑量組較低劑量組血糖、CK、LDH、MDA下降顯著（P﹤0.05），SOD活性顯著增高（P﹤0.05）。
　　2、HE染色結(jié)果①胰腺組織病理變化：正常胰腺組織胰島豐富，形態(tài)規(guī)則呈圓形或類圓形，胰島細胞胞質(zhì)豐富，核居中

6、；模型組胰島形態(tài)不規(guī)則，數(shù)目減少，胰島細胞體積增大，細胞核偏心分布，有的有空泡變形的現(xiàn)象；高、低劑量組較模型組有明顯改善。②心臟組織病理變化：正常大鼠心肌纖維排列整齊，心肌細胞胞質(zhì)豐富，胞核居中；模型組大鼠心肌纖維斷裂、雜亂無章，心肌細胞核偏心分布、大小不等；高、低劑量組較模型組有明顯改善，其中高劑量組改善更明顯，心肌纖維無斷裂，結(jié)構(gòu)整齊，心肌細胞胞核居中。
　　3、免疫組化結(jié)果正常胰腺和心臟組織中陽性染色淡，TNF-α的表達較少

7、；模型組可見大量深棕色顆粒，TNF-α表達較正常組多；藥物干預(yù)組較模型組TNF-α表達下調(diào)，高劑量組下調(diào)顯著。
　　4、western-blot檢測結(jié)果正常心肌組織中NF-?Bp65幾乎不表達；模型組NF-?Bp65表達上調(diào)；藥物干預(yù)組較模型組表達減少，高劑量組減少顯著。
　　【結(jié)論】①糖尿病合并心肌缺血時，血糖、CK、LDH升高，胰腺和心臟病理損傷嚴重，并出現(xiàn)機體氧化應(yīng)激增強和TNF-α和NF-?Bp65表達上調(diào)，提示氧化