利用EST序列對二倍體棉種染色體物理序號的FISH定位.pdf

1、棉花染色體物理序號的確定大多以染色體全長、著絲粒位置、臂長、臂比等形態(tài)學數據為依據。但由于棉花染色體形體較小,很難從形態(tài)上區(qū)分各條染色體,盡管有許多學者報道了棉花四倍體和二倍體核型的研究結果,并對其進行了順序編號,但不同學者之間依然存在著很大的分歧。
　　 本實驗以四倍體棉公認的起源二倍體種之一雷蒙德氏棉為材料,利用熒光原位雜交技術(FISH),選取較長的單拷貝EST序列作為探針,旨在對雷蒙德氏棉13對粗線期染色體進行FISH定

2、位,從而把染色體區(qū)分開。主要研究結果如下:
　　 1.在國內首次在棉花的花粉母細胞中制出了粗線期染色體制片。從D組野生棉遺傳圖譜每個連鎖群上選取3個EST序列,共選取39個EST序列作為探針,對每個探針設計引物,以雷蒙德氏棉基因組為模板進行PCR擴增、回收、純化、測序,最終在每條染色體上篩選出一個單拷貝探針,共十三個探針對雷蒙德氏棉十三條粗線期染色體進行FISH定位,探針長度在866bp-1375bp之間。并最終將十三個EST探

3、針分別定位到十三條雷蒙德氏棉粗線期染色體上。
　　 2.rDNA基因是高度保守的串聯重復序列,通過FISH技術對其在染色體上分布的位置、位點以及拷貝數多少進行比較研究,是確定棉花起源與進化的重要手段之一。根據棉花18SrDNA、5S rDNA基因序列設計引物,以陸地棉標準系TM-1基因組為模板進行PCR擴增、回收、純化、測序。雷蒙德氏棉是棉花四倍體栽培種公認的起源種之一,利用18SrDNA和5S rDNA基因為探針,對雷蒙德氏棉