大鼠離斷肢體保存的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:延長離斷肢體活性保存時(shí)間,延緩組織變性,減輕離體組織的缺血損害,為平戰(zhàn)時(shí)后方離體復(fù)合組織再植手術(shù)創(chuàng)造條件,進(jìn)而為重要復(fù)合組織移植成活和功能恢復(fù)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和臨床經(jīng)驗(yàn)。
　　方法:選健康成年Wistar大鼠(雄性)32只,(體重300—400g),大鼠由解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)一:隨機(jī)選出4只,分為2組,共形成8支離斷肢體模型。第一組采用UW液灌注至灌出液清亮為止。第二組為對(duì)照組,不做特殊處理。兩組均置于

2、4℃冰箱內(nèi)低溫保存24小時(shí),肢體離斷后每間隔6小時(shí)取組織塊行病理檢查。實(shí)驗(yàn)二:隨機(jī)選出16只大鼠分為4組,每組4只,共形成32支離斷肢體模型,第一組為UW液持續(xù)灌注組;第二組為HTK液持續(xù)灌注組。第三組為林格氏液+地塞米松+低分子肝素鈉復(fù)合灌注液持續(xù)灌注組。第四組為生理鹽水持續(xù)灌注組作為對(duì)照組。離斷肢體在4℃冰箱內(nèi)保存并以12ml/h進(jìn)行24小時(shí)持續(xù)灌注,進(jìn)行大體組織觀察。收集不同時(shí)間段的灌注流出液進(jìn)行ALP、ALT、GLU生化檢測(cè),并

3、使用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。同時(shí)在離體12小時(shí)、24小時(shí)取病理標(biāo)本,行HE染色觀察其組織結(jié)構(gòu)變化,透射電鏡檢查觀察其細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。實(shí)驗(yàn)三:隨機(jī)選出4只大鼠,形成離斷肢體模型后,采用UW液在4℃冰箱內(nèi)進(jìn)行間斷灌注,取材及檢測(cè)方法同實(shí)驗(yàn)二,與UW液持續(xù)灌注組在生化指標(biāo)、組織結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)方面進(jìn)行觀察比較。實(shí)驗(yàn)四:選取4只大鼠,離斷肢體后在低溫下間斷灌注無糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液,取材及檢測(cè)方法同上,與UW液間斷灌注組進(jìn)行生化指

4、標(biāo)、組織結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)比較。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:在相同時(shí)間點(diǎn),灌注組與對(duì)照組相比,肌纖維水腫程度輕,斷裂減少,細(xì)胞發(fā)生橫紋溶解減少。實(shí)驗(yàn)二:不同灌注液對(duì)大鼠離斷肢體模型進(jìn)行24小時(shí)持續(xù)灌注,灌注組與對(duì)照組在相同時(shí)間點(diǎn)比較,肌纖維水腫程度輕,斷裂減少,細(xì)胞發(fā)生橫紋溶解減少;線粒體腫脹程度輕,空泡化現(xiàn)象及發(fā)生破裂的數(shù)量減少,肌原纖維排列整齊,間隙增寬不明顯。各灌注組與對(duì)照組在生化指標(biāo)上存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,在相同時(shí)間點(diǎn),灌注組ALT、ALP

5、含量低,GLU含量高。UW液灌注組與HTK液及復(fù)合灌注液灌注組相比較,發(fā)生肌纖維水腫程度輕,斷裂減少,細(xì)胞發(fā)生橫紋溶解減少;線粒體腫脹程度輕,空泡化現(xiàn)象及發(fā)生破裂的數(shù)量減少,肌原纖維排列整齊,間隙增寬不明顯;三組之間生化指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)三:UW液通過不同灌注方式對(duì)大鼠離斷肢體模型進(jìn)行灌注,持續(xù)灌注組與間斷灌注組相比較,病理及超微結(jié)構(gòu)改變程度相當(dāng),兩組之間生化指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)四:使用無糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)大鼠離斷肢體模型進(jìn)行

6、灌注,肢體腫脹嚴(yán)重。UW液間斷灌注組與無糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液間斷灌注組在相同時(shí)間點(diǎn)比較,肌纖維水腫程度輕,斷裂減少,細(xì)胞發(fā)生橫紋溶解減少。線粒體腫脹程度輕,空泡化現(xiàn)象及發(fā)生破裂的數(shù)量減少,肌原纖維排列整齊,間隙增寬不明顯。兩組之間生化指標(biāo)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在相同時(shí)間點(diǎn),UW液灌注組ALT、ALP含量低,GLU含量高。
　　結(jié)論:1、與單純低溫保存相比,對(duì)離斷肢體進(jìn)行灌注后低溫保存效果更好。2、不同灌注液中,使用UW液灌注,可以使離斷