磷酸肌酸對(duì)冷保存的離體大鼠肝臟保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:在目前各移植中心，由于存在著供肝無(wú)法短時(shí)間內(nèi)移植入受體，其中包括供體的運(yùn)輸時(shí)間、移植患者因某些因素未充分完成術(shù)前準(zhǔn)備、手術(shù)當(dāng)中因多次手術(shù)摘除病肝困難等多種因素。因此，延長(zhǎng)供肝保存時(shí)限，減少肝臟組織缺血損傷，降低供肝血流開(kāi)放后的缺血再灌注損傷，成為亟待解決的問(wèn)題。探討不同濃度磷酸肌酸對(duì)冷保存的離體大鼠肝臟保護(hù)作用，并探討其相關(guān)機(jī)理，進(jìn)而為臨床應(yīng)用提供有效的依據(jù)。
　　 方法:選用Wister系雄性大鼠40只，普通級(jí)。將40只

2、大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組（單純UW液灌注肝臟）10只;低劑量組A（以UW液為基液加入CP，濃度為1g/100ml灌注肝臟）10只;中劑量組B（以UW液為基液加入CP，濃度為2g/100ml灌注肝臟）10只;高劑量組C（以UW液為基液加入CP，濃度為3g/100ml灌注肝臟）10只。用大鼠肝臟單純冷保存離體灌注模型，大鼠術(shù)前12h禁食、不禁水，稱重，術(shù)前30min經(jīng)左下肢肌注肝素(100U/100g)，10％水合氯醛以0.3ml/10

3、0g經(jīng)腹腔麻醉，麻醉滿意后，取腹部“十”字形切口進(jìn)入腹腔，分離腹主動(dòng)脈，經(jīng)腹主動(dòng)脈插管，灌注4℃HCA（離體腎保存用枸櫞酸鹽嘌呤溶液）液20ml，游離門(mén)靜脈，經(jīng)門(mén)靜脈插管，對(duì)照組灌注單純4℃UW液，實(shí)驗(yàn)組分別根據(jù)組別灌注以4℃UW液為基液的不同濃度CP，行供肝原位低壓重力灌洗(灌洗量20ml)，同時(shí)打開(kāi)流出道即剪開(kāi)大鼠心臟，灌注同時(shí)沖洗肝臟內(nèi)殘余血液，至肝臟顏色變淡呈均勻土黃色，分離左右三角韌帶及鐮狀韌帶，結(jié)扎左膈靜脈，結(jié)扎并離斷肝動(dòng)脈

4、、下腔靜脈、門(mén)靜脈、膽道，防止灌注液流失。完整切取肝臟，實(shí)驗(yàn)組置于與灌注肝臟所用的相同濃度含CP的4℃的UW液中，對(duì)照組為4℃單純UW液保存。實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用含高、中、低三種不同磷酸肌酸劑量的UW液灌注并低溫保存肝臟，對(duì)照組應(yīng)用單純UW液灌注并低溫保存肝臟，測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)保存液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及乳酸脫氫酶(LDH)活性、肝臟組織中丙二醛(MDA)含量、髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性、肝細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosisindex，AI)、NF

5、-κB陽(yáng)性表達(dá)率，觀察臟組織學(xué)變化。
　　 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組不同劑量在冷保存12h后，ALT及LDH均低于對(duì)照組;18h后丙二醛(MDA)含量、髓過(guò)氧化物酶(MPO)各實(shí)驗(yàn)組均低于對(duì)照組，終點(diǎn)24h各組之間無(wú)明顯差別;肝細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)及NF-κB陽(yáng)性表達(dá)率實(shí)驗(yàn)組在冷保存12h及18h均低于對(duì)照組，終點(diǎn)24h各組之間無(wú)明顯差別;組織學(xué)變化光鏡示:部分肝小葉原有結(jié)構(gòu)消失，出現(xiàn)排列紊亂，部分正常肝臟細(xì)胞出現(xiàn)空泡，甚至有變性產(chǎn)生。在肝

6、臟中央靜脈區(qū)域有一定程度的血液淤積，在肝血竇區(qū)域也存在同樣問(wèn)題。而這些變化和保存時(shí)間長(zhǎng)短有著直接聯(lián)系，隨著冷保存時(shí)間的延長(zhǎng)，改變逐漸加重。高、中、低劑量組的變化較對(duì)照組減輕，各劑量之間無(wú)差別。高劑量實(shí)驗(yàn)組在經(jīng)過(guò)24h冷保存后，肝組織中MDA含量以及保存液中ALT含量均高于對(duì)照組及中、低劑量組。
　　 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)表明，CP對(duì)離體肝臟冷保存有較好的保護(hù)作用，其保護(hù)移植肝臟的機(jī)制可能與減輕能量代謝障礙，降低氧自由基損傷兩個(gè)方面作用有