新型肽類生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)——植物磺肽素PSK的研究.pdf

1、植物磺肽素(phytosulfokine，簡(jiǎn)寫PSK)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新型植物肽類生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。它是兩種短肽類物質(zhì)--磺化的四肽(PSK-β)或五肽(PSK-α)，其結(jié)構(gòu)為[H-Tyr(SO3H)-Ile-Tyr(SO3H)-Thr-OH]或[H-Tyr(SO3H)-Ile-Tyr(SO3H)-Thr-Gln-OH]。1996年，日本學(xué)者M(jìn)atsubyashi等從石刁柏培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)液條件化培養(yǎng)基(conditionedmedium，

2、CM)中發(fā)現(xiàn)了PSK，它可以促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。目前，PSK的研究?jī)H限于日本學(xué)者M(jìn)atsubayashi的一家實(shí)驗(yàn)室，作為一個(gè)新的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，亟待進(jìn)行深入和廣泛的研究。本研究從PSK的化學(xué)合成、生理效應(yīng)、生物分析等方面進(jìn)行了初步研究。主要內(nèi)容如下： 1.利用磺化反應(yīng)將五肽Tyr-Ile-Tyr-Thr-Gln進(jìn)行磺化，通過(guò)柱層析將其磺化產(chǎn)物進(jìn)行分離，再利用薄板層析(TLC)法進(jìn)一步純化。經(jīng)質(zhì)譜鑒定，PSK-α合成成功。

3、 2.在起始密度較低(3.6×104個(gè)·ml-1)的BY-2懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系下，即使在培養(yǎng)基中添加適量的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，細(xì)胞也不能正常生長(zhǎng)和分裂。將不同濃度的CM添加到低密度的BY-2懸浮細(xì)胞液中，CM可以促進(jìn)低密度下BY-2細(xì)胞的增殖。分析表明：CM中確實(shí)存在著促有絲分裂活性的信號(hào)分子。 3.我們用化學(xué)合成的不同濃度的PSK-α添加到BY-2細(xì)胞的低密度培養(yǎng)體系中，來(lái)驗(yàn)證PSK-α的生理效應(yīng)。測(cè)定結(jié)果顯示：在低密度培

4、養(yǎng)體系中，化學(xué)合成的PSK-α促有絲分裂活性與CM中信號(hào)分子的促有絲分裂活性的趨勢(shì)相一致，這說(shuō)明CM中存在的促進(jìn)細(xì)胞增殖的信號(hào)分子就是PSK-α。細(xì)胞的OD600在一定范圍濃度內(nèi)隨著PSK-α濃度的增大而增加，在0.25nmol·L-1～5.0nmol·L-1PSK-α濃度范圍內(nèi)，OD600和PSK-α濃度呈直線關(guān)系。因此該反應(yīng)系統(tǒng)可以用來(lái)作為PSK-α的生物分析系統(tǒng)。 4.通過(guò)層析純化和質(zhì)譜(MS)鑒定首次從小麥愈傷組織、未受