睡眠剝奪對大鼠不同腦區(qū)PrPc表達的影響及PrPc在睡眠剝奪誘導的認知損害中可能的作用.pdf

1、大量的研究已經(jīng)證實睡眠剝奪與認知損害密切相關(guān)，但潛在的機制尚不明確。已有的研究發(fā)現(xiàn)細胞型朊蛋白(cellflarprionprotein，PrPC)在睡眠調(diào)節(jié)和記憶過程中發(fā)揮重要作用，并且它和阿爾茨海默病有多方面的聯(lián)系，而阿爾茨海默病突出的臨床特征是記憶衰退。是否PrPC在睡眠剝奪導致的認知損害中發(fā)揮作用值得研究。
　　 首先，我們把雄性成年Sprague-Dawley大鼠隨機分為3組，分別為：籠養(yǎng)對照組(cagecontrol

2、group，CC組)，水槽對照組(tankcontrolgroup，TC組)即環(huán)境對照組，睡眠剝奪組(sleepdeprivationgroup，SD組)。用改良多平臺睡眠剝奪方法給予大鼠連續(xù)72h的睡眠剝奪。用Morris水迷宮測試評價海馬依賴的空間記憶能力。完成睡眠剝奪及水迷寓測試后，用westernblot技術(shù)檢測大鼠不同腦區(qū)PrPC表達水平。結(jié)果顯示大鼠睡眠剝奪后海馬依賴的空間記憶受損，PrPC的表達在海馬選擇性下調(diào)。
　

3、　 CREB是已知的海馬依賴的學習、記憶存儲和突觸可塑性的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。已有的研究顯示大鼠海馬p-CREB的水平在學習后增加，在睡眠剝奪后減低，提示CREB磷酸化在睡眠剝奪導致的認知損害中發(fā)揮重要作用。PrPC參與調(diào)節(jié)多個信號轉(zhuǎn)導通路的活性，但是否PrPC調(diào)節(jié)海馬CREB磷酸化尚未見報道。為了初步探討睡眠剝奪后記憶損害的相關(guān)信號通路，我們按照上述動物分組，進一步用westernblot技術(shù)和免疫熒光組織化學技術(shù)研究了72-h睡眠剝奪對

4、大鼠不同腦區(qū)p-CREB表達的影響。然后在原代培養(yǎng)的Sprague-Dawley大鼠海馬神經(jīng)元中，用慢病毒介導的RNA干擾技術(shù)沉默PrPC，用westernblot技術(shù)檢測p-CREB表達的變化。我們發(fā)現(xiàn)72-h睡眠剝奪導致大鼠海馬p-CREB的表達選擇性下調(diào)，而總CREB的表達未受影響，這與已有的研究報道相符合。給予原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元針對PrPC的RNA干擾后7天，p-CREB的表達水平明下調(diào)。
　　 已有的研究高度提示成體

5、海馬新生的神經(jīng)元參與學習和記憶。而軸突的形成和生長是神經(jīng)元分化中首要的形態(tài)學改變，這使得神經(jīng)元之間能夠進行信息傳遞。學習和記憶等這些高級神經(jīng)活動更是依賴于神經(jīng)元之間信息的傳遞。已有的研究提示PrpC在神經(jīng)元軸突延伸中發(fā)揮作用。為了驗證低水平的PrPC對海馬神經(jīng)元軸突延伸的影響，我們在來自新生Sprague-Dawley大鼠的原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中，仍舊用慢病毒介導的RNA干擾技術(shù)沉默PrpC，然后用免疫熒光細胞化學技術(shù)觀察海馬神經(jīng)元軸突