支氣管哮喘SD大鼠心肌細(xì)胞凋亡研究.pdf

1、目的：在成功建立SD大鼠支氣管哮喘動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，采用常規(guī)HE染色、心肌組織HSP70免疫組織化學(xué)染色、TUNEL染色及流式細(xì)胞術(shù)相結(jié)合的方法，研究各種實(shí)驗(yàn)條件下心肌組織的損害規(guī)律，以期探討支氣管哮喘時(shí)心肌細(xì)胞損害的病理機(jī)制，為哮喘猝死的法醫(yī)學(xué)死因鑒別診斷提供形態(tài)學(xué)輔助依據(jù)。 方法： 健康雄性SD大鼠120只(四川大學(xué)華西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，一月齡左右，體重100±15克。在成功建立SD大鼠支氣管哮喘模型的基礎(chǔ)上，隨機(jī)

2、分6組：支氣管哮喘發(fā)作腎上腺素組、支氣管哮喘發(fā)作氨茶堿組、支氣管哮喘發(fā)作腎上腺素加氨茶堿組、支氣管哮喘不給予藥物組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組及正常對(duì)照組。每組又依據(jù)斷頸處死時(shí)間的不同，分為2周、4周、6周、8周四個(gè)小組，每小組5只大鼠。取心室段心肌組織，其中一份用10％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，行常規(guī)HE染色、心肌熱休克蛋白70(HSP70)免疫組織化學(xué)染色、末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL染色技術(shù))檢測(cè)，在光

3、學(xué)顯微鏡下觀察并作圖像分析及相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。另外一份心肌組織不固定，行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。 結(jié)果： 1．心肌組織常規(guī)HE染色 各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間無(wú)明顯區(qū)別。心肌細(xì)胞染色清晰，橫紋清楚，細(xì)胞核染色質(zhì)分布均勻，部分區(qū)域可見(jiàn)心肌纖維呈波浪狀改變及心肌纖維斷裂，心肌間質(zhì)未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及心肌細(xì)胞壞死等改變。 2．心肌組織HSP70的免疫組織化學(xué)染色 實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與正常對(duì)照組SD大鼠心肌細(xì)胞在各時(shí)間段內(nèi)HSP

4、70陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)基本呈陰性，實(shí)驗(yàn)組在實(shí)驗(yàn)第2周始，心肌細(xì)胞漿內(nèi)即可見(jiàn)：HSP70染色陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)，隨哮喘發(fā)作時(shí)間的延長(zhǎng)，心肌細(xì)胞漿HSP70染色表達(dá)強(qiáng)度(PI％-HSP70值)逐漸增強(qiáng)，至第8周時(shí)達(dá)最高。另外，依據(jù)實(shí)驗(yàn)各組干預(yù)條件的不同，在哮喘發(fā)作的相同時(shí)間段內(nèi)，心肌細(xì)胞漿HSP70染色陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)強(qiáng)度(PI％-HSP70值)有顯著差異，依次為：支氣管哮喘發(fā)作腎上腺素組>支氣管哮喘發(fā)作腎上腺素加氨茶堿組>支氣管哮喘不給予藥物組>支氣管哮

5、喘發(fā)作氨茶堿組。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和正常對(duì)照組之間，心肌細(xì)胞漿HSP70染色表達(dá)強(qiáng)度沒(méi)有明顯差異。 3．末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù) 實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與正常對(duì)照組SD大鼠心肌細(xì)胞核在各時(shí)間段內(nèi)TUNEL染色陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)基本呈陰性。實(shí)驗(yàn)組在實(shí)驗(yàn)第2周始，心肌細(xì)胞核即有TUNEL染色陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)，隨哮喘發(fā)作時(shí)間的延長(zhǎng)，心肌細(xì)胞核TUNEL染色表達(dá)強(qiáng)度(PI％-TUNEL值)逐漸增強(qiáng)，至第8周時(shí)達(dá)最高峰。據(jù)實(shí)驗(yàn)各組實(shí)

6、驗(yàn)干預(yù)條件的不同，在哮喘發(fā)作的相同時(shí)間段內(nèi)的心肌細(xì)胞核TUNEL染色陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)強(qiáng)度(PI％-TUNEL值)有顯著差異，依次為：支氣管哮喘發(fā)作腎上腺素組>支氣管哮喘發(fā)作腎上腺素加氨茶堿組>支氣管哮喘不給予藥物組>支氣管哮喘發(fā)作氨茶堿組。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和正常對(duì)照組之間，心肌細(xì)胞核TUNEL染色陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)強(qiáng)度無(wú)明顯差異。 4．流式細(xì)胞儀檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組。在實(shí)驗(yàn)組中，哮喘心肌細(xì)胞在第2周始即出現(xiàn)明顯的細(xì)胞

7、凋亡峰，且隨著哮喘發(fā)作時(shí)間的延續(xù)，心肌細(xì)胞凋亡率呈逐漸上升趨勢(shì)，至第8周時(shí)最高。各實(shí)驗(yàn)組中，依據(jù)實(shí)驗(yàn)各組實(shí)驗(yàn)干預(yù)條件的不同，在哮喘發(fā)作的相同時(shí)間段內(nèi)心肌細(xì)胞凋亡率有顯著差異，依次為：支氣管哮喘發(fā)作腎上腺素組>支氣管哮喘發(fā)作腎上腺素加氨茶堿組>支氣管哮喘不給予藥物組>支氣管哮喘發(fā)作氨茶堿組。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和正常對(duì)照組之間沒(méi)有明顯差別。 結(jié)論： 1.支氣管哮喘的SD大鼠，其心肌細(xì)胞有一定程度的損害，心肌細(xì)胞的損害程度隨著哮喘發(fā)作

8、時(shí)間的延長(zhǎng)而加重。 2.哮喘促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡機(jī)制的激活引起心肌細(xì)胞凋亡是哮喘心肌損害的病理機(jī)制中一個(gè)重要因素。心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量和表達(dá)強(qiáng)度隨哮喘發(fā)作時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。 3.某些哮喘治療藥物的使用可能促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生如腎上腺素。 4.法醫(yī)學(xué)哮喘猝死的死因鑒別診斷中，哮喘誘發(fā)心肌細(xì)胞的凋亡而使心功能受損是一個(gè)值得重視的因素。在哮喘猝死的法醫(yī)病理檢查中，除了對(duì)心肌組織常規(guī)的HE檢查外，可以考慮采用心肌組織免疫組織化