西北荒漠地區(qū)駱駝刺根瘤菌多樣性及其系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、本論文綜述了根瘤菌多樣性、分類(lèi)和多相分類(lèi)技術(shù)的研究進(jìn)展；采用表型分析(153項(xiàng)生理生化測(cè)定，數(shù)值分類(lèi))和遺傳型分析(16SrDNAPCR-RFLP，23SrDNAPCR-RFLP，IGSPCR-RFLP，16SrRNA基因全序列分析)等多相分類(lèi)技術(shù)，對(duì)45株分離自我國(guó)甘肅和新疆不同地區(qū)豆科植物駱駝刺的根瘤菌，首次系統(tǒng)地進(jìn)行了多相分類(lèi)和系統(tǒng)發(fā)育研究。 對(duì)甘肅省41個(gè)縣市73個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，總計(jì)200多個(gè)采樣點(diǎn)，進(jìn)行了豆科植物根瘤菌資源的調(diào)

2、查和采集，涉及豆科植物32屬75種，分離純化得到1200多株根瘤菌，斜面保藏和甘油超低溫冰箱保藏，極大豐富了根瘤菌資源庫(kù)，為我國(guó)西部地區(qū)根瘤菌資源研究和開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。 生理生化性狀測(cè)定表明，所有待測(cè)菌株可在50ug/ml林可霉素和pH9的條件下生長(zhǎng)，分離自甘肅阿拉爾的供試菌中9株快生菌性狀更優(yōu)良，耐酸堿能力強(qiáng)，其中CCNWOX04-2可在pH5-pH12范圍內(nèi)生長(zhǎng)，而來(lái)自甘肅安西縣鹽堿地的根瘤菌最高只能耐受pH9。溫度測(cè)試中，

3、40℃條件下，分離自新疆的CCNWOX04-2、CCNWXJ11-2、CCNWXJ40-1均可生長(zhǎng)；在60℃條件下，來(lái)自新疆的絕大多數(shù)能夠生長(zhǎng)，而甘肅只有少數(shù)可以生長(zhǎng)。在唯一碳氮源利用，抗生素和染料抗性測(cè)定、石蕊牛奶實(shí)驗(yàn)等，所有待測(cè)菌株都表現(xiàn)出地區(qū)多樣性，本實(shí)驗(yàn)還將待測(cè)菌株對(duì)重金屬和苯酚的抗性作為生理生化指標(biāo)，甘肅安西縣CCNWAX39-1可耐受600mg/L苯酚，也可在鋅濃度為1.4mmol/L的YMA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。 在數(shù)值分

4、類(lèi)中，所有供試菌株在70％的相似水平上聚在一起。待測(cè)菌株主要分為五個(gè)表觀群，群Ⅰ為快生菌群，均來(lái)自新疆阿拉爾，在91％的相似水平上與R.leguminosarum聚在一起。群Ⅱ、群Ⅲ和群Ⅳ在80％的相似水平上聚在一起，距中慢生根瘤菌屬較近，但并沒(méi)與已知參比菌株聚在一群，為新的獨(dú)立群。群Ⅴ中的4株菌與M.tianshanesnse在88％水平上聚在一起。 數(shù)值分類(lèi)的中心菌株CCNWXJ12-2、CCNWXJ40-4、CCNWAX4

5、4-1、CCNWAX24-1和CCNWOX02-2在與8種其他豆科植物交叉結(jié)瘤實(shí)驗(yàn)表明，駱駝刺根瘤菌結(jié)瘤范圍非常廣，其中CCNWXJ12-2可與6種豆科植物結(jié)瘤，根瘤形狀與寄主有關(guān)。 遺傳型分析(16SrDNAPCR-RFLP，23SrDNAPCR-RFLP，IGSPCR-RFLP)結(jié)果表明，分離自甘肅和新疆45株駱駝刺根瘤菌存在明顯的遺傳多樣性。16S、23SARDRA將45株菌分成3個(gè)遺傳群，多數(shù)按地區(qū)聚群，表現(xiàn)出地區(qū)多樣性