補(bǔ)氣中藥對(duì)骨髓抑制貧血小鼠造血調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 人參為五加科多年生草本植物人參Panax Ginseng.C.A.Mey的根，為常用補(bǔ)氣要藥，具有大補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)脾益肺、生津、安神的功效。西洋參：Panax Quinquefolium 1.同為五加科多年生草本植物的根，功效為補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清火生津。黃芪為豆科多年生草本植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus (Fisch)Bge.var.mongholieus(Bge)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus me

2、mbranaceus(Fisch)Bge的干燥根，味甘性溫， 具有補(bǔ)氣行氣、生肌補(bǔ)血、健脾胃、壯筋骨等功效。本研究對(duì)三種補(bǔ)氣類中藥的皂甙提取物(TSPG、AMI和TSP)的補(bǔ)氣功能和機(jī)理進(jìn)行了研究和比較。 方法 本研究采用復(fù)合造模法造成骨髓抑制貧血小鼠模型，應(yīng)用造血祖細(xì)胞體外培養(yǎng)、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞因子檢測(cè)、免疫組織化學(xué)染色、RT—PCR、熒光定量PCR和Western Blot等技術(shù)。首次從細(xì)胞、蛋白質(zhì)和基因表達(dá)水平對(duì)補(bǔ)氣類中

3、藥提取物的作用及其機(jī)理，進(jìn)行了較系統(tǒng)深入的研究和比較。 結(jié)果 表明三種補(bǔ)氣類中藥提取物，在一定濃度范圍： 1． 能促進(jìn)貧血小鼠外周血像的恢復(fù)、升高BMC數(shù)，尤其是對(duì)．RBC、PLT數(shù)升高、Hb的合成作用明顯。動(dòng)物體內(nèi)用藥可明顯促進(jìn)造血祖細(xì)胞集落生長(zhǎng)；造血祖細(xì)胞的體外用藥培養(yǎng)中，TSPG表現(xiàn)類生長(zhǎng)因子樣作用，對(duì)造血祖細(xì)胞既有直接促進(jìn)作用也有間接作用。西洋參莖葉皂甙對(duì)祖細(xì)胞的作用范圍較窄，主要對(duì)巨核系祖細(xì)胞生長(zhǎng)呈現(xiàn)促進(jìn)作用

4、，作用方式與人參有相似之處，既體現(xiàn)直接又有間接作用；而AMI似乎以間接調(diào)控為主。 2．可促進(jìn)貧血小鼠升高BMC數(shù)，一方面促進(jìn)靜止期BMC進(jìn)入細(xì)胞周期，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖，另一方面促進(jìn)抗凋亡蛋白Bcl—xL的表達(dá)，抑制凋亡的發(fā)生，維持細(xì)胞的存活。 3．可影響造血微環(huán)境。促進(jìn)成纖維細(xì)胞集落增殖，通過促進(jìn)基質(zhì)細(xì)胞分泌造血生長(zhǎng)因子，調(diào)控血發(fā)生。三種中藥促進(jìn)造血生長(zhǎng)因子表達(dá)的時(shí)間曲線略有區(qū)別。TSP在造血受損初期能促進(jìn)TPO 的基因

5、表達(dá)，使骨髓抑制造成的血小板下降能提早得以恢復(fù)。 4．人參總皂甙、西洋參莖葉皂甙可調(diào)控造血生長(zhǎng)因子受體EPOR的基因表達(dá)。從基因水平影響造血祖細(xì)胞對(duì)胞外刺激信號(hào)的應(yīng)答；三種中藥都能促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子GATA—1的基因表達(dá)，通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子的基因表達(dá)影響其特定靶基因的轉(zhuǎn)錄。 5． 在不同濃度對(duì)對(duì)進(jìn)K562細(xì)胞增殖都表現(xiàn)不同的調(diào)節(jié)作用，只有高濃度的TSPG促進(jìn)GATA—1蛋白的增強(qiáng)表達(dá)，再一次顯示其獨(dú)特的生長(zhǎng)因子樣活性。

6、 結(jié)論上述結(jié)果顯示，三種補(bǔ)氣中藥對(duì)造血的調(diào)控是多種途徑多層次進(jìn)行的。一方面可以影響組成微環(huán)境的基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞因子基因表達(dá)或蛋白分泌，促進(jìn)造血；另一方面也可以調(diào)控祖細(xì)胞本身的轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)而調(diào)控生長(zhǎng)因子或生長(zhǎng)因子受體的基因表達(dá)，影響造血細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)信號(hào)的應(yīng)答，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期。補(bǔ)氣類三種中藥還可以通過促進(jìn)抗凋亡蛋白的表達(dá)，抑制凋亡的發(fā)生，維持血發(fā)生過程中細(xì)胞的存活。而達(dá)到“補(bǔ)氣生血”的功效，本研究從首次比較了三種補(bǔ)氣中藥的共性和個(gè)性，

7、研究提示，它們雖然都能補(bǔ)氣生血，但作用環(huán)節(jié)和作用途徑不盡相同，有的似乎以間接調(diào)控為主；有的則既有間接作用又有直接作用；TSPG對(duì)粒系、紅系和巨核系三系均有影響， TSP 似乎只對(duì)巨核系造血個(gè)性功效顯著；TSPG和 TSP 能促進(jìn)EPOR的基因表達(dá)，而AMI對(duì)此卻無明顯作用；雖然都能促進(jìn)IL-6的分泌，但I(xiàn)L-6的分泌時(shí)間曲線是不同的；雖然補(bǔ)氣三種中藥對(duì)K562細(xì)胞增殖都表現(xiàn)雙向調(diào)節(jié)作用，只有TSPG促進(jìn)GATA-1蛋白的增強(qiáng)表達(dá)；上述