氧化應激、轉化生長因子-β1和巢蛋白表達變化在甲狀腺功能亢進大鼠腎損害中的作用.pdf

1、目的：通過測定過氧化氫酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量在甲狀腺功能亢進大鼠腎組織中的改變，了解氧化應激在甲亢性腎損傷中的作用：并通過對轉化生長因子-β1(transforming growth factor -β1，TGF-β1)、足

2、細胞骨架蛋白巢蛋白(Nestin)在甲亢模型大鼠腎組織中表達變化的觀察，來探討甲狀腺功能與腎臟損傷的關系，進一步了解甲亢性腎損傷的特點及發(fā)病機制。 方法：本試驗通過L-T4(優(yōu)甲樂)灌胃法(50μg·1 00g-1·d-1)制作甲狀腺功能亢進大鼠模型(HT組)，飼養(yǎng)同時同量生理鹽水灌胃大鼠作為對照組(A組)。觀察連續(xù)灌胃25天(A1及HT1組)、45天(A2及HT2組)、60天(A3及HT3組)大鼠一般情況、甲狀腺功能、腎功能及

3、腎組織形態(tài)學的改變；應用組織勻漿測定腎臟中各種抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)，活性及氧化產物(MDA)含量的改變情況；并應用免疫組織化學方法檢測腎組織中TGF-β1、Nestin在腎組織中的表達；同時檢測24h尿蛋白排泄情況。 結果：1 一般情況對照大鼠飲食水情況、外觀、精神狀態(tài)及日?；顒虞^灌胃前無明顯變化，并且對照大鼠平均體重穩(wěn)定增加。甲亢大鼠飲食、飲水較對照組明顯增加；大便呈糊狀，并含有不消化食物；毛色無光澤，大部

4、分出現嚴重的脫毛現象；活動增加、驚恐躁動、易受激惹及肌肉細微震顫；并且體重較同期對照組減輕(p＜0.05)，而腎重/體重與同期對照組相比顯著增加(p＜0.01)。 2 甲狀腺功能檢查甲亢組在25、45、60天時，FT3及FT4均較同期對照組顯著增高(P＜0.01)，TSH較同期對照組顯著降低(P＜0.01)；甲亢三組間甲功水平亦存在顯著差異，隨著優(yōu)甲樂作用時間的延長，FT3、FT4進行性增加而TSH進行性減低(P＜0.01)。

5、3.血肌酐、24h尿蛋白定量改變甲亢組血肌酐在25天及45天時與同期對照組相比無明顯差異(P＞0.05)。在60天時，甲亢組Scr比同期對照組顯著增高(P＜0.05)，亦顯著高于HT1組及HT2組(P＜0.05)。 甲亢組在25天時24h尿蛋白定量較同期對照組增高(P＞0.05)。在45天和60天時24h尿蛋白定量均較同期對照組顯著增高(P＜0.01)。甲亢三組間相比其24h尿蛋白定量也存在顯著差異(P值均小于0.01)。

6、 4 腎組織中氧化應激指標甲亢組CAT、GSH-Px、SOD活性均較同期對照組顯著降低(P＜0.01)。甲亢三組間抗氧化酶指標亦存在顯著差異，隨病程延長各酶活性進行性降低。HT3組CAT、SOD活性較HTl及HT2組均顯著降低(P＜0.01)；HT3組GSH-Px活性較HT1及HT2組亦顯著降低(P值分別小于0.01及0.05)。HT2組大鼠GSH-Px、SOD活性較HT1組顯著降低(P＜0.01)，HT2組CAT活力較HT1組亦顯著

7、降低(P＜0.05)。 甲亢組MDA含量均較同期對照組顯著增加(P＜0.01)。 三組間MDA亦存在顯著差異(P＜0.01)，隨病程延長MDA含量進行性增加。 5 病理改變透射電鏡：正常組大鼠腎小球足細胞結構完整，足突排列整齊清晰。甲亢組大鼠腎小球基底膜厚度不均勻增加；足細胞足突局灶性融合，有的甚至消失；毛細血管內皮窗孔徑增大；足細胞線粒體峭部分或大部分融合或消失，部分膜融合或消失；粗面內質網有脫顆粒相象；系膜細胞和內皮

8、細胞增生腫脹，系膜基質增多；并且這些病變隨著甲亢病情的加重而加重。 6 免疫組化結果TGF-β1結果：對照組TGF-β1的表達較少，陽性染色物主要位于胞漿；甲亢組在腎小球和腎小管均有TGF-β1蛋白表達增多，隨著甲亢病程的進展，TGF-β1表達呈遞增趨勢。甲亢組與同期對照組相比，在25天時TGF-β1陽性面積百分率顯著增加(P＜0.05)，在45天和60天時陽性面積百分率增加的更明顯(P＜0.01)。甲亢三組間亦存在顯著差異，H

9、T3組較H1及HT2組均顯著增加(P＜0.01，P＜0.05)； HT2組較HT1組亦顯著增加(P＜0.05)。 Nestin結果：甲亢組與同期對照組相比，在25天時Nestin陽性面積百分率稍減少，但無統計學意義(P＞0.05)，在45天和60天時顯著減少(P＜0.05，P＜0.01)。甲亢三組間亦存在差異，HT2及HT3組較HTl組均顯著減少(P＜0.01)；HT2組與HT3組無顯著差異(P＞0.05)。 7 甲狀腺

10、功能、組織勻漿指標、TGF-β1及Nestin之間相關性的分析結果CAT、GSH-Px、SOD活性與FT3、FT4呈負相關，與TSH呈正相關；MDA含量與FT3、FT4呈正相關，與TSH呈負相關。TGF-β1的表達與FT3、FT4呈正相關，與TSH呈負相關；與抗氧化酶活性呈負相關，與MDA含量呈正相關。Nestin與FT3、FT4呈負相關，與TSH呈正相關；與CAT、GSH-Px、SOD呈正相關，與MDA含量負相關。24h尿蛋白定量與F

11、T3、FT4正相關，與TSH負相關；與TGF-β1正相關；與Nestin負相關。 結論：本試驗通過L-T4(優(yōu)甲樂)灌胃法制作甲狀腺功能亢進大鼠模型，甲亢組大鼠表現出的癥狀、體征及甲狀腺功能檢查均符合甲亢的特點。隨著甲亢病程的進展出現腎臟損傷，表現為腎臟肥大、血肌酐的升高、蛋白尿的出現；并且腎組織中CAT、GSH-Px、SOD活性逐漸降低，MDA含量逐漸升高。說明甲狀腺激素水平的增高可以影響腎臟正常的生理功能；甲狀腺功能亢進大鼠