轉化生長因子β1、波形蛋白和結蛋白在糖尿病大鼠腎組織中表達的研究.pdf

1、近年來,腎小管-間質病變在纖維化腎臟疾病的慢性進展過程中的作用越來越此起關注.研究證明,腎小管間質中的間質細胞,尤其是成纖維細胞,在腎間質纖維化中起關鍵作用.近幾年的研究又進一步認為,腎間質的成纖維細胞不僅來源于其自身的增殖,部分可能由腎小管上皮細胞轉化而來.與該過程相并行的是腎臟致纖維化因子-轉化生長因子-β<,1>(TGF-β<,1>)在腎臟局部持續(xù)、過度的表達,而且,TGF-β<,1>除了能促進成纖維細胞及間質細胞增殖外,還能誘導

2、腎小管上皮細胞向腎間質成纖維細胞轉化.然而,在糖尿病腎組織,尤其在腎纖維化的進展過程中是否存在類似的表型轉化目前尚無定論.為更好地揭示在DN纖維化進展過程中腎間質-小管病變的機制及其與TGF-β<,1>之間的相互關系,該實驗利用鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)誘導的糖尿病大鼠模型,觀察在模型建立后的不同觀察時點TGF-β<,1>和波形蛋白(Vimentin)、結蛋白(Desmin)的mRNA在大鼠腎皮質中的表達,探討

3、糖尿病大鼠不同階段TGF-β<,1>、Vimentin和Desmin在大鼠腎皮質中表達的變化規(guī)律及其相互關系.方法87只清潔級雄性SD大鼠,體重180~200g,隨機分為糖尿病組(DM組,N=49)和對照組(NC組,n=38)兩大組.分籠顆粒飼料喂養(yǎng),隨意飲水.DM組給予一次性腹腔內注射1.0﹪STZ(streptozotocin,鏈脲佐菌素,購自Sigma公司)70mg/kg,STZ溶于檸檬酸緩沖液中(pH=4.2),NC組腹腔注射等

4、容量的檸檬酸緩沖液.注射STZ后48小時和72小時,分別測血糖大于16.7mmol/l(300mg/dL)且尿糖持續(xù)3天+++以上的大鼠視為糖尿病大鼠,并在整個實驗周期內該標準不變.分別于造模成功后第3天、第7天、第14天、第30天、第60天和第90天每組各隨機取6只大鼠,用股動脈放血法處死;收集股動脈血用于測定血糖、血肌酐等.取樣前稱大鼠體重,收集尿用于測定尿白蛋白與尿肌酐.處死后,立即取出雙側腎臟稱重,去包膜的右側腎臟放入凍存管,置

5、液氮中,后以-80℃冰箱保存?zhèn)溆?液氮下研磨組織,Trizol液提取大鼠腎皮質總RNA,用RT-PCR法半定量檢測在不同觀察時點糖尿病大鼠腎皮質中TGF-β<,1>和Vimentin、Desmin、mRNA的表達水平.四、結論1.STZ誘導的糖尿病大鼠腎皮質中TGF-β<,1>和Vimentin mRNA表達隨病程推移逐漸增多、Desmin mRNA的表達隨病程推移卻逐漸減少,且TGF-β<,1> mRNA表達的顯著增多早于Viment

6、in和Desmin mRNA的表達的改變.2.糖尿病大鼠腎皮質Desmin、mRNA與TGF-β<,1>、Vimentin mRNA的表達均呈顯著負相關;Vimentin mRNA的表達與TGF-β<,1>的mRNA的表達呈顯著正相關;糖尿病大鼠腎皮質TGF-β<,1> mRNA和Vimentin mRNA的表達與腎重值呈顯著正相關,Desmin的mRNA表達與腎重值呈顯著負相關.3.經STZ誘導的糖尿病大鼠腎皮質中可能存在部分腎小管上