抵抗素與炎癥及動脈粥樣硬化.pdf

1、第一部分：心絞痛患者血漿抵抗素水平的研究。 目的：觀察不同心絞痛患者循環(huán)抵抗素水平的變化，以及循環(huán)抵抗素水平與代謝指標、炎癥指標等之間的相關(guān)性。 方法：序貫入選因疑診冠心病而在阜外醫(yī)院行擇期冠脈造影檢查的患者114例，根據(jù)造影結(jié)果及臨床表現(xiàn)，將研究對象分為不穩(wěn)定心絞痛組(UAP，46例)、穩(wěn)定心絞痛組(SAP，37例)和對照組(31例)。收集患者一般臨床資料及生化指標，免疫比濁法檢測高敏C反應蛋白(hs-CRP)水平；放

2、免法檢測血清胰島素和內(nèi)皮素-1(ET-1)水平；ELISA法檢測不同人群血漿抵抗素、大內(nèi)皮素的水平。 結(jié)果：UAP組血漿抵抗素水平(12.09(8.40，18.08)ng/ml)顯著高于SAP組(9.04(7.09，11.44)ng/ml)(P<0.05)，以及對照組(8.71(6.58，11.56)ng/ml)(p<0.001)；而SAP組和對照組之間無明顯差異。我們證實了抵抗素與年齡(R<'2>=0.06，P=0.009)、

3、白細胞計數(shù)(R<'2>=0.05， P=0.013)以及hs-CRP(R<'2>=0.05，P=0.014)之間呈正相關(guān)，而且還發(fā)現(xiàn)血漿抵抗素與大內(nèi)皮素(R<'2>=0.05，P=0.013)以及ET-1(R<'2>=0.07，P=0.005)水平呈正相關(guān)。在校正年齡、性別和腰圍后，除了大內(nèi)皮素外，這些相關(guān)性仍存在。 結(jié)論：血漿抵抗素水平在冠心病患者、尤其是UAP患者顯著升高，而且與白細胞計數(shù)、hs-CRP及FT-1水平獨立正相

4、關(guān)。提示抵抗素可能通過影響系統(tǒng)的炎癥反應和內(nèi)皮活化而參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。 第二部分：CRP對人單核細胞抵抗素表達影響的實驗研究。 目的：本部分主要研究CRP對培養(yǎng)的人外周血單核細胞抵抗素mRNA和蛋白表達的影響。 方法：采用密度梯度離心法分離人外周血單核細胞。在培養(yǎng)基中分別加入不同濃度的CRP(0， 5，10，25，50μg/ml)，培養(yǎng)24小時，以檢測CRP影響抵抗素表達的劑量效應。另一組實驗檢測CRP影響抵

5、抗素表達的時間效應，即在培養(yǎng)基中加入25μg/ml CRP，分別培養(yǎng)不同的時間(0，3，6，12，24小時)。分別用real time PCR和ELISA方法檢測單核細胞抵抗素mRNA表達及細胞培養(yǎng)液中抵抗素的濃度。 結(jié)果：CRP呈劑量依賴性誘導抵抗素mRNA表達，與空白對照組抵抗素mRNA水平相比，5μg/mlCRP刺激單核細胞24 h，抵抗素mRNA表達顯著增加2.1倍(p<0.05)。當CRP濃度為25μg/ml，該效應最

6、大，為9.8倍(p<0.05)。對照組培養(yǎng)基中的抵抗素水平很低，甚至檢測不出。但是與5μg/ml CRP孵育后，培養(yǎng)基中抵抗素水平為0.35±0.0lng/ml(p<0.05)。當CRP為50μg/ml時，這種刺激效應最大，抵抗素是水平為1.19±0.30ng/ml(p<0.05)。CRP誘導抵抗素的表達也呈時間依賴性。25μg/mLCRP與人單核細胞孵育不同的時間發(fā)現(xiàn)，抵抗素m RNA在CRP刺激3小時后即開始明顯升高，為基礎(chǔ)水平的2

7、．9倍(P<0.05)，并隨刺激的時間延長而進一步增加，于24小時達峰值(10倍，P<0.05)。而培養(yǎng)基中的抵抗素蛋白水平經(jīng)CRP刺激3小時后仍未檢測出，6小時后，抵抗素蛋白水平才顯著升高，為0.21±0.12ng/ml(p<0.05)，也于24小時達峰值，為0.89±0.16ng/ml(p<0.05)。 結(jié)論：促炎因子CRP可呈劑量依賴性和時間依賴性地誘導人單核細胞抵抗素mRNA和蛋白表達，可能是急性冠狀動脈綜合征患者循環(huán)中

8、抵抗素水平升高的機制之一，也進一步證實了ICRP在血管炎癥和動脈粥樣硬化的病理生理過程中的直接作用。 第三部分：他汀類藥物對CRP誘導的抵抗素表達的調(diào)節(jié)作用。 目的：本研究主要比較辛伐他汀、洛伐他汀、血脂康幾種他汀類藥物對CRP誘導的人外周血單核細胞抵抗素表達的影響，并對相關(guān)的信號通路進行初步探討。 方法：采用密度梯度離心法分離人外周血單核細胞。單核細胞分別與不同濃度的辛伐他汀(0.1，1，10μM)、洛伐他汀(

9、0.1，1，10μM)或血脂康(25，50，100μg/ml)預孵育2小時，再與25μg/ml CRP共同培養(yǎng)24小時，以檢測藥物對CRP誘導的抵抗素表達的影響。另一組信號通路實驗中，單核細胞分別與不同他汀類藥物以及甲羥戊酸(100μM)或法尼基焦磷酸(FPP)(10μM)或櫳牛兒基牻牛兒基焦磷酸(GGPP)(10μM)預孵育2小時，再與25μg/ml CRP共同孵育24小時。分別用teal time PCR和ELISA方法檢測單核細胞

10、抵抗素mRNA表達及細胞培養(yǎng)液中抵抗素的濃度。 結(jié)果：辛伐他汀和洛伐他汀與單核細胞預孵育2小時能劑量依賴性抑制25μg/mlCRP誘導的抵抗素表達。1μM辛伐他汀和洛伐他汀均能顯著抑制抵抗素m RNA水平表達，分別為CRP刺激組的55.4±4.2％，59.6±5.1％(P<0.05)，以及蛋白水平表達[0.54±0.02ng/ml，0.58±0.08ng/ml，與CRP刺激組(0.89±0.16ng/ml)比較P<0.05]。甲

11、羥戊酸和GGPP幾乎完全逆轉(zhuǎn)兩種他汀類藥物對CRP誘導的抵抗素表達的抑制作用。50μg/ml血脂康亦顯著抑制抵抗素m RNA水平表達，為CRP刺激組的34.9±5.4％(P<0.01)；下調(diào)抵抗素蛋白水平表達，為0.47±0.07ng/ml(P<0.01)。甲羥戊酸和GGPP只能部分逆轉(zhuǎn)血脂康對CRP誘導的抵抗素表達的抑制作用。 結(jié)論：三種他汀類藥物均能完全或部分通過抑制類異戊二烯代謝及GGPP依賴的信號通路，不同程度地抑制CR