抵抗素與炎癥及動(dòng)脈粥樣硬化.pdf

1、第一部分：心絞痛患者血漿抵抗素水平的研究。 目的：觀察不同心絞痛患者循環(huán)抵抗素水平的變化，以及循環(huán)抵抗素水平與代謝指標(biāo)、炎癥指標(biāo)等之間的相關(guān)性。 方法：序貫入選因疑診冠心病而在阜外醫(yī)院行擇期冠脈造影檢查的患者114例，根據(jù)造影結(jié)果及臨床表現(xiàn)，將研究對(duì)象分為不穩(wěn)定心絞痛組(UAP，46例)、穩(wěn)定心絞痛組(SAP，37例)和對(duì)照組(31例)。收集患者一般臨床資料及生化指標(biāo)，免疫比濁法檢測(cè)高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平；放

2、免法檢測(cè)血清胰島素和內(nèi)皮素-1(ET-1)水平；ELISA法檢測(cè)不同人群血漿抵抗素、大內(nèi)皮素的水平。 結(jié)果：UAP組血漿抵抗素水平(12.09(8.40，18.08)ng/ml)顯著高于SAP組(9.04(7.09，11.44)ng/ml)(P<0.05)，以及對(duì)照組(8.71(6.58，11.56)ng/ml)(p<0.001)；而SAP組和對(duì)照組之間無(wú)明顯差異。我們證實(shí)了抵抗素與年齡(R<'2>=0.06，P=0.009)、

3、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(R<'2>=0.05， P=0.013)以及hs-CRP(R<'2>=0.05，P=0.014)之間呈正相關(guān)，而且還發(fā)現(xiàn)血漿抵抗素與大內(nèi)皮素(R<'2>=0.05，P=0.013)以及ET-1(R<'2>=0.07，P=0.005)水平呈正相關(guān)。在校正年齡、性別和腰圍后，除了大內(nèi)皮素外，這些相關(guān)性仍存在。 結(jié)論：血漿抵抗素水平在冠心病患者、尤其是UAP患者顯著升高，而且與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、hs-CRP及FT-1水平獨(dú)立正相

4、關(guān)。提示抵抗素可能通過(guò)影響系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)和內(nèi)皮活化而參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。 第二部分：CRP對(duì)人單核細(xì)胞抵抗素表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究。 目的：本部分主要研究CRP對(duì)培養(yǎng)的人外周血單核細(xì)胞抵抗素mRNA和蛋白表達(dá)的影響。 方法：采用密度梯度離心法分離人外周血單核細(xì)胞。在培養(yǎng)基中分別加入不同濃度的CRP(0， 5，10，25，50μg/ml)，培養(yǎng)24小時(shí)，以檢測(cè)CRP影響抵抗素表達(dá)的劑量效應(yīng)。另一組實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CRP影響抵

5、抗素表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)，即在培養(yǎng)基中加入25μg/ml CRP，分別培養(yǎng)不同的時(shí)間(0，3，6，12，24小時(shí))。分別用real time PCR和ELISA方法檢測(cè)單核細(xì)胞抵抗素mRNA表達(dá)及細(xì)胞培養(yǎng)液中抵抗素的濃度。 結(jié)果：CRP呈劑量依賴(lài)性誘導(dǎo)抵抗素mRNA表達(dá)，與空白對(duì)照組抵抗素mRNA水平相比，5μg/mlCRP刺激單核細(xì)胞24 h，抵抗素mRNA表達(dá)顯著增加2.1倍(p<0.05)。當(dāng)CRP濃度為25μg/ml，該效應(yīng)最

6、大，為9.8倍(p<0.05)。對(duì)照組培養(yǎng)基中的抵抗素水平很低，甚至檢測(cè)不出。但是與5μg/ml CRP孵育后，培養(yǎng)基中抵抗素水平為0.35±0.0lng/ml(p<0.05)。當(dāng)CRP為50μg/ml時(shí)，這種刺激效應(yīng)最大，抵抗素是水平為1.19±0.30ng/ml(p<0.05)。CRP誘導(dǎo)抵抗素的表達(dá)也呈時(shí)間依賴(lài)性。25μg/mLCRP與人單核細(xì)胞孵育不同的時(shí)間發(fā)現(xiàn)，抵抗素m RNA在CRP刺激3小時(shí)后即開(kāi)始明顯升高，為基礎(chǔ)水平的2

7、．9倍(P<0.05)，并隨刺激的時(shí)間延長(zhǎng)而進(jìn)一步增加，于24小時(shí)達(dá)峰值(10倍，P<0.05)。而培養(yǎng)基中的抵抗素蛋白水平經(jīng)CRP刺激3小時(shí)后仍未檢測(cè)出，6小時(shí)后，抵抗素蛋白水平才顯著升高，為0.21±0.12ng/ml(p<0.05)，也于24小時(shí)達(dá)峰值，為0.89±0.16ng/ml(p<0.05)。 結(jié)論：促炎因子CRP可呈劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性地誘導(dǎo)人單核細(xì)胞抵抗素mRNA和蛋白表達(dá)，可能是急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者循環(huán)中

8、抵抗素水平升高的機(jī)制之一，也進(jìn)一步證實(shí)了ICRP在血管炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理過(guò)程中的直接作用。 第三部分：他汀類(lèi)藥物對(duì)CRP誘導(dǎo)的抵抗素表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。 目的：本研究主要比較辛伐他汀、洛伐他汀、血脂康幾種他汀類(lèi)藥物對(duì)CRP誘導(dǎo)的人外周血單核細(xì)胞抵抗素表達(dá)的影響，并對(duì)相關(guān)的信號(hào)通路進(jìn)行初步探討。 方法：采用密度梯度離心法分離人外周血單核細(xì)胞。單核細(xì)胞分別與不同濃度的辛伐他汀(0.1，1，10μM)、洛伐他汀(

9、0.1，1，10μM)或血脂康(25，50，100μg/ml)預(yù)孵育2小時(shí)，再與25μg/ml CRP共同培養(yǎng)24小時(shí)，以檢測(cè)藥物對(duì)CRP誘導(dǎo)的抵抗素表達(dá)的影響。另一組信號(hào)通路實(shí)驗(yàn)中，單核細(xì)胞分別與不同他汀類(lèi)藥物以及甲羥戊酸(100μM)或法尼基焦磷酸(FPP)(10μM)或櫳牛兒基牻牛兒基焦磷酸(GGPP)(10μM)預(yù)孵育2小時(shí)，再與25μg/ml CRP共同孵育24小時(shí)。分別用teal time PCR和ELISA方法檢測(cè)單核細(xì)胞

10、抵抗素mRNA表達(dá)及細(xì)胞培養(yǎng)液中抵抗素的濃度。 結(jié)果：辛伐他汀和洛伐他汀與單核細(xì)胞預(yù)孵育2小時(shí)能劑量依賴(lài)性抑制25μg/mlCRP誘導(dǎo)的抵抗素表達(dá)。1μM辛伐他汀和洛伐他汀均能顯著抑制抵抗素m RNA水平表達(dá)，分別為CRP刺激組的55.4±4.2％，59.6±5.1％(P<0.05)，以及蛋白水平表達(dá)[0.54±0.02ng/ml，0.58±0.08ng/ml，與CRP刺激組(0.89±0.16ng/ml)比較P<0.05]。甲

11、羥戊酸和GGPP幾乎完全逆轉(zhuǎn)兩種他汀類(lèi)藥物對(duì)CRP誘導(dǎo)的抵抗素表達(dá)的抑制作用。50μg/ml血脂康亦顯著抑制抵抗素m RNA水平表達(dá)，為CRP刺激組的34.9±5.4％(P<0.01)；下調(diào)抵抗素蛋白水平表達(dá)，為0.47±0.07ng/ml(P<0.01)。甲羥戊酸和GGPP只能部分逆轉(zhuǎn)血脂康對(duì)CRP誘導(dǎo)的抵抗素表達(dá)的抑制作用。 結(jié)論：三種他汀類(lèi)藥物均能完全或部分通過(guò)抑制類(lèi)異戊二烯代謝及GGPP依賴(lài)的信號(hào)通路，不同程度地抑制CR