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1、觀察骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)對(duì)樹突狀細(xì)胞存活力及其生成炎癥介質(zhì)IL-12的影響,探討OPG對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化中炎癥免疫反應(yīng)的影響。 [方法]:取健康志愿者外周血分離出單個(gè)核細(xì)胞,采用貼壁培養(yǎng)法得到單核細(xì)胞,經(jīng)三種細(xì)胞因子——重組人粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM—CSF)、重組人白細(xì)胞介素4(IL-4)和重組人腫瘤壞死因子(rhTNF—α)聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng),9-ll天后收獲得到純度較高的成熟樹突狀細(xì)胞。收獲的
2、樹突狀細(xì)胞按1×10<'5>/well接種,分為空白對(duì)照組;細(xì)胞核因子κβ受體活化因子配體RANKL組(1.0μg/m1):RANKL+OPG組(均為1.0μg/m1)培養(yǎng)觀察4天,臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞。同時(shí)將樹突狀細(xì)胞按4×10<,5>/well接種,分5組培養(yǎng):1.對(duì)照組2.RANKL組(1.0μg/m1)3-5.RANKL+OPG組:OPG濃度分別為O.5,1.0,2.O μg/m1。培養(yǎng)12小時(shí)后ELISA定量檢測(cè)細(xì)胞上清液中I
3、L-12的表達(dá)。 [結(jié)果]:與空白對(duì)照組相比,RANKL組活細(xì)胞數(shù)增多,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,培養(yǎng)第一、二天RANKL組和RANKL+OPG組存活細(xì)胞數(shù)差別不大,第三天開(kāi)始RANKL+OPG組活細(xì)胞數(shù)少于RANKL組(day3,2.53±0.58 VS 5.3±0.71×10<'4>個(gè),P<0.05:day4,2.05±0.48 VS 4.6±0.46×10<'4>個(gè),P<0.05)。與RANKL組相比隨著OPG組OPG劑量的增加
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