人肺腺癌A-549細胞膜鉀離子通道特性與細胞增殖關系的研究.pdf

1、目的：探討腫瘤細胞離子通道表達異常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和增殖的關系是當前腫瘤基礎研究的新熱點。本研究通過觀察人肺腺癌A-549細胞膜電壓門控性K+電流的特性及鉀通道阻斷劑四乙胺（TEA）對A-549細胞K+電流和細胞增殖的影響，探討應用鉀通道阻斷劑抑制肺腺癌細胞增殖的可行性，為該領域的進一步研究奠定基礎。方法：以人肺腺癌細胞系A-549細胞為研究對象，培養(yǎng)24-72小時后，選擇單個貼壁良好、立體感強的細胞備用。①細胞電生理實驗：用全細胞膜片

2、鉗技術記錄細胞膜離子通道特性。將微推進器推進微管電極尖端貼至細胞膜，負壓抽吸形成高阻封接，并吸破細胞膜形成全細胞膜片；采用去極化階躍方案引出A-549細胞的電壓依賴性外向K+電流，然后將10mmol/L的TEA加至細胞浴液中，記錄TEA對K+電流的影響。②細胞體外增殖實驗：用四甲基偶氮唑鹽比色試驗（MTT法）檢測0.2、2、20、40和60mmol/L 的TEA分別作用細胞24、48和72小時的酶聯(lián)檢測吸光度值（A），比較不同TEA組對

3、細胞增殖的影響。結果：①全細胞膜片鉗記錄模式下，A-549細胞在測試電壓范圍-30至+110mV,保持電壓為-70mV時,記錄到一種跨膜外向性電流,該跨膜電流具有電壓依賴性，并且500ms內(nèi)不失活；將10mmol/L的TEA加入細胞浴液，可明顯抑制該跨膜離子電流，在測試電壓為+110mV時，抑制程度為電流從1057.52±59.17pA降低至212.26±11.96pA,電流抑制率為79.92％（p<0.01）。②MTT法細胞增殖實驗，

4、各TEA劑量組作用細胞24小時后A值比較顯示：A值隨著TEA濃度的增加而降低，實驗組20、40和60mmol/L 的TEA與空白對照組以及組間兩兩比較，差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）,而0.2和2mmol/L 的TEA與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義 ,表明20、40和60mmol/L 的TEA 能明顯抑制肺腺癌A-549細胞的體外增殖，抑制率分別為 43％、61％和 78％。結論：人肺腺癌細胞系A-549細胞中存在外向性電壓門控性