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1、目的:探討原芝麻素對(duì)人肺腺癌A-549細(xì)胞株的抗增殖和誘導(dǎo)凋亡作用及其機(jī)制,為開(kāi)發(fā)抗腫瘤中藥提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)
方法:采用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)人肺腺癌A-549細(xì)胞;應(yīng)用MTT法測(cè)定原芝麻素對(duì)人肺腺癌A-549細(xì)胞株的抗增殖及細(xì)胞毒性作用;應(yīng)用倒置顯微鏡、HE染色法來(lái)觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(Flowcytometry,F(xiàn)CM)分析細(xì)胞周期分布和凋亡情況;AnnexinV/PI雙標(biāo)法分析細(xì)胞凋亡率;測(cè)定細(xì)胞Bc
2、l-2及Bax表達(dá)水平;應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)藥物作用前后凋亡蛋白激酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表達(dá)變化并探討芝麻素對(duì)人肺腺癌A-549細(xì)胞株的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用機(jī)制。
結(jié)果:(1)MTT法檢測(cè)結(jié)果表明:10μg/ml-80μg/ml芝麻素對(duì)人肺腺癌A-549細(xì)胞株均有明顯抑制作用,且呈現(xiàn)出濃度和時(shí)間依賴性;(2)形態(tài)學(xué)觀察:倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞體積變小變圓,核染色質(zhì)凝集,細(xì)胞
3、間連接疏松,貼壁能力減弱;HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞質(zhì)脫水濃縮,伊紅染色增強(qiáng)等典型的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;(3)流式細(xì)胞儀分析結(jié)果:40μg/m1藥物作用48h后,出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡峰,且S期細(xì)胞明顯增多,而G期細(xì)胞明顯減少,多數(shù)細(xì)胞阻滯在S期;Bcl-2蛋白的表達(dá)降低,Bax蛋白的表達(dá)升高。(4)免疫細(xì)胞化學(xué)(SABC法)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)增加與對(duì)照組相比較均有顯著差異(P<0
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