拉布拉多犬血清生化指標(biāo)的測定及EPM2癲癇致病基因Epm2b的檢測.pdf

1、拉布拉多犬(Labrador Retriever)是具有優(yōu)秀血統(tǒng)的犬，起源于加拿大紐芬蘭島，最早于18世紀(jì)末由英國商船從紐芬蘭島帶至英國。由于嗅覺靈敏、占有欲強、耐力良好，現(xiàn)今該犬活躍于緝毒、搜爆、救護、警衛(wèi)、消防和導(dǎo)盲等許多工作領(lǐng)域。犬癲癇是由大腦皮質(zhì)機能障礙引起的一種遺傳性疾病，是運動、感覺、意識行為和植物神經(jīng)障礙的一種綜合征，以突然發(fā)作和周期性發(fā)作為特征。近年來犬癲癇(epilepsy)的發(fā)病率在國內(nèi)引進犬中有日漸上升的趨勢。犬癲

2、癇的發(fā)生與體內(nèi)一些生化物質(zhì)量的改變有很大關(guān)系，尤其以葡萄糖、肌酸激酶(CK)、血清鈣、血清鎂、堿性磷酸酶(ALP)、骨鈣素(Bone gla protein BGP)等變化最為明顯，可以稱為癲癇相關(guān)性血液生化指標(biāo)。有研究表明，90％以上癲癇犬的血液生生化指標(biāo)會出現(xiàn)異常。公安部南京警犬研究所引進的拉布拉多犬中出現(xiàn)了疑似EPM2癥狀的癲癇病犬。為了揭示正常犬與癲癇犬之間的差異，我們對公安部南京警犬研究所大部分的引進拉布拉多犬進行了血液常規(guī)生

3、化指標(biāo)檢測，總共21項，其中包括葡萄糖、肌酸激酶(CK)、血清鈣、血清鎂、堿性磷酸酶(ALP)等；同時，還對10頭采樣犬(包括3頭癲癇病犬)進行了骨鈣素(BGP)檢測。最后對檢測數(shù)據(jù)分別進行了統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果顯示，癲癇犬血清堿性磷酸酶(ALP)、Ca<'2+>、Mg<'2+>、葡萄糖、骨鈣素(BGP)水平均明顯低于對照組，肌酸激酶(CK)水平則明顯高于對照組，差異顯著；其余15項指標(biāo)差異均不顯著。 2005年，研究人員在犬中發(fā)現(xiàn)了首例人

4、類以外的EPM2型癲癇，又稱為拉佛拉病(Lafora'disease)，其致病原因為Epm2b基因發(fā)生特異性“GC”拷貝擴增突變。為了檢測Epm2b突變基因在公安部南京警犬研究所的癲癇犬中是否存在，我們提取10頭拉布拉多犬血液基因組DNA，根據(jù)NCBI公布的株犬屬(Canis familiaris)Epm2b基因序列(AY560905)，采用OligO5.0軟件在基因序列的上、下游各設(shè)計一引物，引物對內(nèi)涵蓋了文獻(xiàn)報道Epm2b基因可能發(fā)

5、生突變的全部區(qū)域。經(jīng)PCR擴增，1％瓊脂糖凝膠和8％聚丙烯酰胺凝膠顯帶，直接回收測序，而后與Epm2b相應(yīng)片段作序列比較，檢測癲癇病犬該基因的異常之處。應(yīng)用DNAStar軟件進行分析，并計算每頭拉布拉多犬之間核苷酸的同源性。結(jié)果成功檢測到2頭病犬Epm2b的序列發(fā)生特異性“GC”拷貝擴增突變，可以確診為犬的EPM2型癲癇。另外1頭癲癇病犬和表型正常犬并未出現(xiàn)特異性“GC”拷貝突變。分析結(jié)果顯示5頭犬核苷酸同源性為93.61％，表型正常的