拉布拉多犬髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良和神經(jīng)類型相關(guān)基因SNP位點的檢測.pdf

1、目的:1、檢測拉布拉多犬基因組DNA中與髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良密切相關(guān)的5個基因中的6個SNP位點,以期為拉布拉多犬的選育提供有效的遺傳學(xué)診斷方法。
　　2、檢測拉布拉多犬基因組DNA中與神經(jīng)類型密切相關(guān)的5個基因中的7個SNP位點,以期為拉布拉多犬神經(jīng)類型的早期鑒定提供分子遺傳學(xué)鑒定指標(biāo)。
　　方法:本研究所選用的犬和其信息均由中國導(dǎo)盲犬大連培訓(xùn)基地(以下簡稱基地)提供;
　　1、經(jīng)影像學(xué)診斷,篩選出典型的6只髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良

2、和11只正常拉布拉多犬作為實驗對象,采取靜脈血,提取血細(xì)胞的基因組DNA樣本,采用PCW測序方法對17個樣本的5個基因中的6個SNP位點:LAMA2(CFA1:70997779),LRR1(CFA8:29247021),SCR(CFA24:28944481),COL6A3(CFA25:51031100,51040259)和FN1(CFA37:25095511)進(jìn)行變異型檢測,并計算分型所占的百分比,分析正常犬和髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良犬的差異趨勢

3、。
　　2、依據(jù)基地成熟的導(dǎo)盲犬神經(jīng)類型行為學(xué)評估標(biāo)準(zhǔn),選取典型的安靜、活潑、膽小型(弱型)三種神經(jīng)類型的犬各6只為研究對象,采取靜脈血,提取血細(xì)胞的基因組DNA樣本,采用PCR-RFLP分析法和PCW測序方法對18個樣本5個基因的7個SNP位點:COMT(G482A)、MAOB(T199C)、SLC1A2(T471C)、ABCB1(A985T、T3442C、377-378 insC)、GNB1L(961-962 insG)進(jìn)行變

4、異型檢測,并統(tǒng)計分析SNP位點的變異型與神經(jīng)類型的關(guān)聯(lián)度。
　　結(jié)果:1、LAMA2(CFA1:70997779),LRR1(CFA8:29247021),SCR(CFA24:28944481),COL6A3(CFA25:51031100)和FN1(CFA37:25095511) SNP位點的變異型與拉布拉多犬的髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良沒有顯著差異趨勢。COL6A3(CFA25:51040259)SNP位點的A/A型與拉布拉多犬的髖關(guān)節(jié)發(fā)育

5、不良存在明顯的差異趨勢(＞30％)。
　　2、COMT基因的G482A SNP位點G/G型在安靜型犬中所占比例顯著高于膽小型(P=0.026),但該兩種類型的犬所占比例與活潑型均不存在顯著性差異(P＞0.05);G/A型在膽小型犬中所占比例顯著高于活潑型和安靜型(P=0.011,P=0.011);A/A型在活潑型犬中所占比例顯著高于安靜型和膽小型(P=0.008,P=0.008)。MAOB基因的T199C SNP位點在安靜、活潑、

6、膽小這三種類型中所占比例均沒有顯著差異(P＞0.05)。SLC1A2基因的T471C SNP位點T/T型在活潑型犬中所占比例顯著高于安靜型和膽小型(P=0.026,P=0.006);T/C型在活潑型犬中所占比例顯著低于安靜型和膽小型(P=0.023,P=0.011);C/C型在活潑型犬中所占比例顯著低于安靜型和膽小型(P=0.008,P=0.008)。ABCB1基因的A985T SNP位點T/T型在活潑型犬中所占比例顯著高于膽小型(P=

7、0.014),但該兩種類型的犬所占比例與安靜型均不存在顯著性差異(P＞0.05);T/A型在活潑型犬中所占比例顯著低于安靜型和膽小型(P=0.005,P=0.002);而A/A型在安靜、活潑、膽小這三種類型中所占比例均沒有顯著差異(P＞0.05)。ABCB1基因的T3442C SNP位點T/T型在活潑型犬中所占比例顯著高于膽小型(P=0.045),但該兩種類型的犬所占比例與安靜型均不存在顯著性差異(P＞0.05);T/C型在膽小型、安靜

8、型、活潑型犬中所占比例均存在顯著性差異(P＜0.05),且膽小型所占比例最高(50％),活潑型所占比例最低(0％);C/C型在安靜、活潑、膽小這三種類型中所占比例均沒有顯著差異(P＞0.05)。ABCB1基因的377-378insC和GNB1L基因的961-962insG均沒有發(fā)現(xiàn)顯著性差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1、COL6A3(CFA25:51040259)SNP位點的A/A型可能成為拉布拉多犬髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良的實用性遺傳