陸地棉HB紅花近等基因系差異表達(dá)基因分析.pdf

1、HB紅花性狀來源于野生二倍體比克氏棉，陸地棉HB紅花基因被初步定位于7號(hào)染色體上。在本研究中,利用 SSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)HB紅花基因進(jìn)行精細(xì)定位，基因芯片和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)也被應(yīng)用于評(píng)估陸地棉HB紅花近等基因系的相關(guān)功能。
　　1、利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)HB紅花基因進(jìn)行精細(xì)定位。根據(jù)近等基因系與輪回親本基因表達(dá)模式的差異，最終得到了5對(duì)差異引物，分別為A07-0646、A07-0592、A07-0594、CH07-44、CH07

2、-53，并構(gòu)建了一個(gè)全長81.8cM的連鎖群，成功將HB紅花基因定位于A07-0592與A07-0594之間，與它們的遺傳距離分別是7.9cM和37.6cM。對(duì)比目前已有的陸地棉基因組測(cè)序信息，A07-0592和A07-0594之間物理距離為33Kb，包含21個(gè)基因，其中大于400bp的基因有4個(gè)，分別為MT-A70家族蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶、類谷氨酰胺轉(zhuǎn)酰胺酶類家族蛋白、八氫番茄紅素合成酶，為下一步克隆重要性狀相關(guān)基因并進(jìn)行功

3、能分析與驗(yàn)證奠定基礎(chǔ)，為陸地棉種質(zhì)創(chuàng)新和遺傳改良提供依據(jù)。
　　2、利用棉花全基因組cDNA芯片進(jìn)行表達(dá)差異分析，獲得陸地棉HB紅花近等基因系與輪回親本間明顯差異表達(dá)基因80個(gè)（表達(dá)差異10倍以上），其中上調(diào)基因56個(gè)、下調(diào)基因24個(gè)，主要是與代謝和次生代謝調(diào)節(jié)相關(guān)基因、生物合成、細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)等有關(guān)聯(lián)的cDNAs及某些未知確切功能的基因。利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，對(duì)通過基因芯片篩選出的4個(gè)明顯差異表達(dá)基因進(jìn)行分析，分析結(jié)果進(jìn)一

4、步明確了相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控規(guī)律，探討紅花性狀形成的因素。
　　3、應(yīng)用差異蛋白組學(xué)方法，對(duì)陸地棉HB118與其輪回親本118之間不同器官、不同生育時(shí)期的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行了研究，檢測(cè)出表達(dá)豐度上在2倍以上的差異蛋白157個(gè)，其中花期葉片差異蛋白57個(gè)、絮期葉片差異蛋白56個(gè)、花差異蛋白44個(gè)，依據(jù)功能分為以下幾類：
　?。?）與碳水化合物代謝相關(guān)蛋白；
　?。?）光合作用相關(guān)蛋白；
　?。?）細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白；