輸卵管積水對(duì)子宮內(nèi)膜容受性影響的研究.pdf

1、目的：研究輸卵管積水對(duì)IVF-ET結(jié)局的影響；探討輸卵管積水對(duì)窗口期子宮內(nèi)膜組織基因表達(dá)譜的改變，篩選出輸卵管積水影響子宮內(nèi)膜容受性的差異基因；并對(duì)其中的差異表達(dá)基因在子宮內(nèi)膜的mRNA及蛋白表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證，探討其臨床意義。 方法： 1.統(tǒng)計(jì)分析：2003年8月～2005年8月輸卵管積水行IVF-ET143個(gè)周期(積水組)及輸卵管其它病變無(wú)積水行IVF-ET 263個(gè)周期(阻塞組)，比較兩組IVF-ET結(jié)局的差異。

2、 2.寡核苷酸芯片技術(shù)：取輸卵管積水、輸卵管阻塞不伴積水和正常女性窗口期子宮內(nèi)膜組織，分別提取組織總RNA、逆轉(zhuǎn)錄成cDNA、生物素標(biāo)記合成cRNA探針，與A毋metrix U133A2.0基因表達(dá)譜芯片雜交，用Affymetrix公司的GCOS1.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以SignalLog：Ratio≥2或≤-2的數(shù)據(jù)點(diǎn)為顯著性差異表達(dá)基因的篩選標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫(kù)查詢基因的功能，進(jìn)行差異表達(dá)基因功能分類。 3.real-t

3、ime PCR實(shí)驗(yàn)：從上述篩選出的差異表達(dá)基因譜中，選擇有顯著差異表達(dá)的骨橋蛋白(OPN)和GdA(又名胎盤(pán)蛋白14，PP14)以及與OPN相互結(jié)合構(gòu)成胚胎粘附的整合素p3作為研究指標(biāo)。采用real-time PCR方法對(duì)31例輸卵管積水、29例輸卵管阻塞不伴積水以及21例正常對(duì)照患者窗口期子宮內(nèi)膜組織中上述三種基因表達(dá)量進(jìn)行驗(yàn)證。 4.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)：對(duì)各組患者子宮內(nèi)膜中骨橋蛋白(OPN)、整合素p3和GdA相應(yīng)蛋白表達(dá)變化

4、進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析驗(yàn)證。SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。P<0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果： 1.IVF-ET治療結(jié)局 在移植同等質(zhì)量的胚胎后，輸卵管積水組的臨床妊娠率32.87％、胚胎著床率18.61％，早期流產(chǎn)率19.15％、異位妊娠率17.02％；輸卵管阻塞組臨床妊娠率49.8％、胚胎著床率31.87％，早期流產(chǎn)率6.87％、異位妊娠率4.58％。 2.DNA微陣列 (1)差異表達(dá)基因積

5、水組比正常組、阻塞組比正常組、積水組比阻塞組，分別篩選出顯著差異表達(dá)基因588條、180條和750條，按基因主要功能可分為：酶、細(xì)胞粘附分子、細(xì)胞骨架蛋白相關(guān)基因、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子、金屬離子結(jié)合蛋白、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白相關(guān)基因、免疫反應(yīng)相關(guān)蛋白、載體蛋白相關(guān)基因、功能未知的基因等。 (2)積水組比正常組表達(dá)差異基因共有588條基因表達(dá)有差異，其中表達(dá)上調(diào)為351條，表達(dá)下調(diào)為237條。表達(dá)上調(diào)的和表達(dá)下調(diào)基因中均以酶活性相關(guān)基因最多、

6、其次是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白基因。 (3)阻塞組比正常組表達(dá)差異基因共有180條基因表達(dá)有差異，其中表達(dá)上調(diào)為106條，表達(dá)下調(diào)為74條。表達(dá)差異基因亦以酶活性相關(guān)基因最多、其次是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白基因。 (4)積水組比阻塞組表達(dá)差異基因共有750條基因表達(dá)有差異，其中表達(dá)上調(diào)為302條，表達(dá)下調(diào)為448條。表達(dá)差異基因除外酶活性相關(guān)基因最多的是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白基因。 3.Real-time PCR實(shí)驗(yàn)： (1)三組患者窗口

7、期子宮內(nèi)膜組織中OPN基因的表達(dá)差異積水組、阻塞組和對(duì)照組患者子宮內(nèi)膜組織中OPN相對(duì)表達(dá)量依次為0.6238±0.2690、0.8955±0.3887、和1.1065±0.7821；三組間兩兩相比OPN均無(wú)明顯差異。 (2)三組患者窗口期子宮內(nèi)膜組織中整合素β3基因的表達(dá)差異積水組、阻塞組和對(duì)照組患者子宮內(nèi)膜組織中整合素β3相對(duì)表達(dá)量依次為0.1945±0.1024、 0.8285±0.1945和1.2541±0.5245；積

8、水組與阻塞組相比，積水組與對(duì)照組相比有明顯差異。 (3)三組患者窗口期子宮內(nèi)膜組織中GdA基因的表達(dá)差異積水組、阻塞組和對(duì)照組患者子宮內(nèi)膜組織中GdA相對(duì)表達(dá)量依次為2.0815±0.3425、3.1578±0.6712、和4.1257±0.9476；積水組與對(duì)照組相比、阻塞組與對(duì)照組相比有明顯差異。 4.免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)： (1)三組患者窗口期子宮內(nèi)膜組織中OPN的表達(dá)差異OPN定位于子宮內(nèi)膜腺上皮及腔上皮細(xì)胞

9、，基質(zhì)細(xì)胞中無(wú)表達(dá)或僅極少量表達(dá)。三組相比無(wú)顯著性差異。 (2)三組患者窗口期子宮內(nèi)膜組織中整合素β3的表達(dá)差異整合素p3定位于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞和(或)腔上皮細(xì)胞，基質(zhì)細(xì)胞僅極少量表達(dá)。大部分的輸卵管積水患者的子宮內(nèi)膜上整合素β3表達(dá)缺失或呈弱陽(yáng)性。積水組的表達(dá)強(qiáng)度顯著低于阻塞組及對(duì)照組。 (3)三組患者窗口期子宮內(nèi)膜組織中GdA的表達(dá)差異 GdA定位于子宮內(nèi)膜腺上皮及腔上皮細(xì)胞，基質(zhì)細(xì)胞中無(wú)表達(dá)或僅極少量表達(dá)。積水組

10、和阻塞組的表達(dá)強(qiáng)度較對(duì)照組都明顯降低。 結(jié)論： 1.輸卵管積水患者IVF-ET治療的臨床妊娠率低、早期流產(chǎn)率高； 2.輸卵管積水對(duì)窗口期子宮內(nèi)膜多種基因的表達(dá)產(chǎn)生影響；其中表達(dá)差異最大的基因是酶活性相關(guān)基因和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白基因。 3.輸卵管積水和輸卵管其他病變不影響窗口期子宮內(nèi)膜OPN基因的表達(dá)、轉(zhuǎn)錄及其蛋白質(zhì)的合成分泌； 4.輸卵管積水抑制窗口期子宮內(nèi)膜上整合素β3基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄及其蛋白合成分泌