磷脂酰肌醇3-激酶與胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶在人乳腺癌中的活化及其相關(guān)性分析.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文磷脂酰肌醇3激酶與胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶在人乳腺癌中的活化及其相關(guān)性分析姓名：張英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：宋繼謁2002.3.1博士學(xué)位論文原位癌—乳腺癌動(dòng)態(tài)過(guò)程中的變化。采用Westernblot方法測(cè)定P13Kp85亞單位蛋白表達(dá)；經(jīng)免疫沉淀純化P13一K，以磷脂酰肌醇(PhosphotidylInositol，PI)為底物，用激酶活性檢測(cè)方法測(cè)定其磷酸轉(zhuǎn)移酶效率；RT—PCR方法檢測(cè)P

2、13一Kp85亞單位mRNA表達(dá)。結(jié)果表明，P13一K無(wú)論在蛋白表達(dá)，還是在激酶活性和mRNA表達(dá)方面，在乳腺癌組織中，均處于高水平，而在乳腺良性增生和非典型增生一原位癌組織中無(wú)明顯增高趨勢(shì)。說(shuō)明P13一K在乳腺癌形成后才被活化，提示P13～K途徑參與乳腺癌后期進(jìn)展階段的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。目前對(duì)于Erk與乳腺癌關(guān)系的研究，已發(fā)現(xiàn)在人乳腺癌中Erk蛋白及其磷酸化蛋白的表達(dá)和激酶活性增高，原位RT—PCR的研究表明乳腺癌細(xì)胞中ErkmRNA亦增加。

3、為了進(jìn)一步明確Erk在人乳腺癌發(fā)生過(guò)程中的作用，本研究第二部分分別從蛋白表達(dá)、激酶活性和mRNA水平，首次研究了Erk2在乳腺正常組織一良性增生一非典型增生一原位癌一乳腺癌動(dòng)態(tài)過(guò)程中的變化。通過(guò)WesternNot方法，我們分別對(duì)乳腺癌、非典型增生一原位癌、良性增生及乳腺正常組織，進(jìn)行了Erk2蛋白水平的測(cè)定，Erk2蛋白表達(dá)的變化表現(xiàn)為：乳腺癌一非典型增生一原位癌良性增生乳腺正常組織；經(jīng)過(guò)特異的免疫沉淀方法純化Erk2蛋白，以髓基質(zhì)蛋

4、白(MyelinBasicProtein，MBP)為底物，分別對(duì)乳腺癌、非典型增生一原位癌、良性增生及乳腺正常組織，測(cè)定其磷酸轉(zhuǎn)移酶活性的變化，結(jié)果表現(xiàn)為：乳腺癌一非典型增生一原位癌良性增生一乳腺正常組織；應(yīng)用RT—PCR方法，分別對(duì)乳腺癌、非典型增生一原位癌、良性增生及乳腺正常組織，進(jìn)行了Erk2mRNA表達(dá)的研究，結(jié)果呈現(xiàn)乳腺癌非典型增生一原位癌良性增生乳腺正常組織的趨勢(shì)。我們的研究說(shuō)明Erk2在乳腺癌發(fā)生的動(dòng)態(tài)過(guò)程即乳腺正常組織一

5、良性增生一非典型增生一原位癌—乳腺癌過(guò)程中被活化，Erk2在乳腺癌發(fā)生的起始階段與進(jìn)展階段均處于活化狀態(tài)，提示MAPK途徑參與乳腺癌發(fā)生的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。鑒于P13一K途徑和MAPK途徑之間存在交叉關(guān)系，在論文第三部分我們將P13一K與Erk2激酶活性進(jìn)行了相關(guān)陛分析，以進(jìn)一步明確兩條途徑在乳腺癌發(fā)生中是否存在協(xié)調(diào)關(guān)系。相關(guān)性分析表明，在乳腺癌階段，P13一K與Erk2激酶活性呈負(fù)相關(guān)，而在非典型增生一原位癌，良性增生及周圍正常組織中，無(wú)明顯