EGF影響人子宮肌瘤平滑肌細胞多聚化的作用機制.pdf

1、[目的]子宮肌瘤(uterine myoma)是女性生殖系統(tǒng)最常見的一種良性腫瘤,是由子宮平滑肌細胞異常增殖形成的,故又稱為子宮平滑肌瘤(uterine leiomyoma,UL)。目前已經(jīng)有明確報道表皮生長因子(Epidermal growth factor,EGF)在子宮肌瘤的發(fā)病中具有非常重要的作用,因此我們的研究目的是探討EGF在子宮肌瘤發(fā)生和發(fā)展過程中的作用機制,從而為子宮肌瘤的非手術治療提供理論依據(jù)。
　　 [方法]

2、(1)子宮肌瘤病人術后取子宮肌瘤和鄰近正常子宮肌組織為對照,采用western blot檢測組織中EGFR(Epidermal growth factor receptor)、p44/42
　　 MAPK(p44/42 mitogen-activated protein kinase)的表達和磷酸化水平；(2)采用酶消化法培養(yǎng)子宮平滑肌(HM-SMCs)和子宮肌瘤平滑肌(HL-SMCs),并通過細胞計數(shù)、免疫熒光、western

3、 blot等手段鑒定其生長特性；(3)100 ng/mLEGF處理HM-和HL-SMCs24 h,LSC檢測BrdU摻入率、多聚化,WST-1檢測細胞增殖；并且采用western blots檢測EGFR、p44/42 MAPK、AKT(Protein kinase B)、S6K(S6 kinase)的表達及磷酸化變化,p27蛋白的表達。
　　 [結果]在正常子宮肌和子宮肌瘤平滑肌細胞的原代培養(yǎng)中,發(fā)現(xiàn)10％胎牛血清(fetal

4、bovine serum,FBS)無酚紅的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時,子宮肌瘤平滑肌細胞的分化和增殖水平都較低。我們研究了子宮肌瘤與相應的子宮肌組織水平EGFR的表達和MAPK信號通路的激活水平,發(fā)現(xiàn)與相應的正常子宮肌組織相比,雖然在子宮肌瘤組織中總EGFR表達量低,但相對phospho-EGFR水平較高,而phospho-p44/42 MAPK水平較低。在子宮肌瘤平滑肌細胞中EGF能夠通過EGFR和MAPK信號通路刺激細胞DNA合成

5、,并且EGF的作用能夠被EGFR抑制劑AG1478和MEK抑制劑PD98059抑制；而在正常子宮平滑肌細胞沒有促進細胞周期的作用。通過western blots實驗檢測,我們發(fā)現(xiàn)雖然EGF對兩種細胞p44/42 MAPK的活性都有激活作用,但在正常子宮平滑肌細胞中,EGF引起p44/42 MAPK持續(xù)平穩(wěn)的激活,并且伴隨著p44/42 MAPK信號通路下游p27表達水平的上調(diào)；而在子宮肌瘤平滑肌細胞中,EGF誘導p44/42 MAPK快

6、速瞬時的激活,并且在激活后迅速下降,最終抑制p44/42 MAPK磷酸化,此過程伴隨著p27蛋白極低水平的上調(diào)。同時,我們還發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤平滑肌細胞中,EGF誘導的EGFR和AKT的磷酸化水平也較低。另外,EGF抑制子宮平滑肌細胞、子宮肌瘤平滑肌細胞的增殖,但是卻能夠促進子宮肌瘤平滑肌細胞的多聚化。
　　 [結論]本研究表明EGF通過EGFR-p44/42 MAPK信號通路促進HL-SMCs的DNA合成,進而促進細胞多聚化,為EG