子宮平滑肌瘤中AnnexinⅠ的表達及意義.pdf

1、目的：本研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，建立子宮平滑肌瘤組織及正常子宮肌層組織的二維電泳圖譜，篩選并鑒定子宮平滑肌瘤組織與正常子宮肌層組織間的差異表達蛋白并進行表達水平的驗證，以期望得到與子宮平滑肌瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)蛋白，為最終發(fā)現(xiàn)子宮平滑肌瘤治療標(biāo)靶提供重要信息。 方法：收集2006年5月-2007年9月在溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)婦女50例，取術(shù)后新鮮子宮平滑肌瘤標(biāo)本和距瘤旁2CM以上正常子宮肌層組織。所有肌瘤標(biāo)本均

2、經(jīng)病理學(xué)診斷為普通型子宮平滑肌瘤，所有正常肌層組織均經(jīng)病理學(xué)診斷為正常子宮肌層。取10例標(biāo)本提取總蛋白，采用雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)得到各組凝膠圖譜。采用PDQuest軟件進行合成、對比和差異分析，識別子宮平滑肌瘤與正常子宮肌層之間差異表達蛋白點；選取差異蛋白質(zhì)點，膠內(nèi)酶解后行肽指紋圖分析及網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫鑒定，鑒定差異蛋白質(zhì)。然后分別采用RT-PCR方法和免疫組織化學(xué)方法從mRNA水平和蛋白水平驗證AnnexinⅠ在子宮平滑肌瘤和正常子

3、宮肌層的表達。 結(jié)果：建立了正常子宮肌層組織和子宮平滑肌瘤雙向凝膠電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)在至少5對組織中均有相同變化的差異點共有37個。與正常組織相比，在肌瘤組織中表達上調(diào)大于5倍的蛋白質(zhì)點有10個(P＜0.05)，在肌瘤組織中表達下調(diào)大于5倍的蛋白質(zhì)點有27個(P＜0.05)。 在此基礎(chǔ)之上，采用自動凝膠采樣系統(tǒng)對差異表達的蛋白質(zhì)斑點進行自動的采集，然后用特異性的胰酶消化蛋白質(zhì)，酶解后的肽段采用LCQDecaXP型高效液相色譜

4、.質(zhì)譜聯(lián)用儀進行質(zhì)譜分析。在37個差異表達的蛋白質(zhì)點中，11個蛋白點通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫的檢索得到了初步的鑒定。 對AnnexinⅠ蛋白的差異分析發(fā)現(xiàn)，在mRNA及蛋白水平上，正常子宮肌瘤組織AnnexinⅠ的表達顯著低于相應(yīng)肌瘤組織(P＜0.05)。 結(jié)論：本研應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法比較人子宮平滑肌瘤和正常子宮肌層間的差異表達蛋白，發(fā)現(xiàn)子宮平滑肌瘤組織和正常子宮肌層組織間存在蛋白質(zhì)表達的差異，對部分差異蛋白進行了質(zhì)譜分析，