TSA對(duì)小鼠早期胚胎體外發(fā)育的研究.pdf

1、目的：小鼠是生命科學(xué)研究最常用的模型動(dòng)物，小鼠早期胚胎體外發(fā)育技術(shù)在許多的領(lǐng)域都起著重要的作用，比如發(fā)育生物學(xué)，胚胎移植等。小鼠早期胚胎體外發(fā)育阻滯，是實(shí)驗(yàn)研究中經(jīng)常遇到的問題。KSOM等一些培養(yǎng)液在許多實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)對(duì)突破早期胚胎發(fā)育有著積極的作用，但是囊胚移植后的成熟率低成為了普遍存在的問題。
　　TSA(Trichostatin A)，具有抑制真菌作用的化合物。很多實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明了使用TSA處理過(guò)的動(dòng)物早期胚胎，核移植后胚胎的發(fā)

2、育率都有明顯升高，原因是 TSA通過(guò)抑制去乙酰化酶的活性來(lái)提高組蛋白的乙?；潭?，促進(jìn)表觀遺傳重編程。
　　所以，在本次實(shí)驗(yàn)中使用TSA對(duì)小鼠早期胚胎進(jìn)行處理，觀察其在體外發(fā)育的過(guò)程和變化，探討 TSA對(duì)小鼠早期胚胎體外發(fā)育的影響。
　　方法：
　?。?）超數(shù)排卵：C57BL/6小鼠，3-4周齡，雌性，SPF級(jí)，PMSG10 IU/只腹腔給藥，48h后hCG10 IU/只腹腔給藥，致超數(shù)排卵，15H后收集小鼠的卵母細(xì)胞

3、。
　?。?）孤雌胚的建立：根據(jù)文獻(xiàn)資料以KSOM為培養(yǎng)液，使用不同參數(shù)的電激活卵母細(xì)胞并培養(yǎng)24H，觀察記錄卵裂率和囊胚率。從而確定合適的電激活參數(shù)。
　?。?）在KSOM中添加濃度為0μmol/L，50μmol/L和100μmol/L的TSA分別培養(yǎng)12H和24H，之后觀察和記錄24H以及第6天的卵裂率和囊胚率。
　?。?）在顯微鏡下對(duì)2細(xì)胞期和囊胚期胚胎計(jì)數(shù)。通過(guò)數(shù)據(jù)分析說(shuō)明TSA對(duì)小鼠的早期胚胎發(fā)育的作用。

4、r>　　結(jié)果：
　?。?）通過(guò)4次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，最終確定孤雌胚的電激活參數(shù)為脈沖強(qiáng)度1.2Kv/cm，脈沖寬度100μs，時(shí)間間隔1s，脈沖次數(shù)2次。
　?。?）通過(guò)4次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，分別在KSOM中加入濃度為0μmol/L，50μmol/L和100μmol/L的TSA。觀察發(fā)現(xiàn)加入濃度為50μmol/L和100μmol/L的TSA培養(yǎng)12H，小鼠胚胎細(xì)胞發(fā)育到2細(xì)胞期和囊胚期的成功率都有所增加，但是差異不顯著。
　　結(jié)論：