人細小病毒B19和TLR3在橋本氏甲狀腺炎發(fā)病機理中的作用.pdf

1、橋本氏甲狀腺炎（Hashimoto’s thyroiditis, HT）又稱慢性淋巴細胞性甲狀腺炎，于1912年由日本學者橋本策博士首先報道而得名，是人類最常見的器官特異性自身免疫性疾病。臨床上，HT常見于女性，患者血清常有多種自身抗體。HT的主要病理學表現(xiàn)為：甲狀腺內大量淋巴細胞浸潤及次級淋巴濾泡形成，甲狀腺濾泡上皮細胞常嗜酸性變（Hürthle細胞形成）并進行性破壞。 HT不僅會引起甲狀腺功能持續(xù)低下，而且與甲狀腺癌及惡性淋巴瘤的發(fā)

2、生相關，嚴重影響患者的生活質量甚至生命。該病雖經百年研究，其病因及發(fā)病機理仍未闡明。大量研究表明，遺傳以及環(huán)境因素與HT的病因密切相關，其中環(huán)境因素中的病毒感染越來越受到關注。但其發(fā)病機制目前并不清楚。
　　人細小病毒B19（parvovirus B19, B19）是一種無包膜單鏈DNA病毒，屬于自主性細小病毒，與非自主性細小病毒的區(qū)別即在宿主細胞中的復制并不需要其他病毒的參與。是小病毒屬中唯一對人類致病的病毒。B19感染與多種疾

3、病發(fā)生密切相關，其中，與HT的關系是該領域的最新發(fā)現(xiàn)之一。實驗室以及美國、德國、日本多個實驗室的獨立研究表明，B19感染與HT的發(fā)病有關，但其機制尚需進一步研究。
　　二十世紀末，Hoffmann和Beutler先后在果蠅和小鼠細胞中證實了Toll樣受體（Toll-like receptors, TLRs）的存在。作為一大類細胞膜受體分子， TLRs能夠識別病毒等病原微生物，啟動固有免疫反應并產生大量的促炎癥因子和共刺激分子，誘導

4、適應性免疫的發(fā)生。由于這兩位科學家在先天免疫激活方面的突出貢獻，他們同時獲得了2011年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎。TLR3作為TLR家族的重要成員之一，主要表達于樹突狀細胞，通過識別病毒dsRNA，激活NF-ΚB,IRF3以及AP-1參與抗病毒反應。有研究發(fā)現(xiàn)，TLR3在HT甲狀腺濾泡上皮細胞中有表達，間接提示HT發(fā)生與某種感染有關。
　　鑒于以上兩方面的研究，推測B19感染很可能激活了TLR3的表達。在HT報道百年之際，我們使用HT

5、連續(xù)切片用免疫組織化學方法及免疫組織化學雙標記方法，研究了B19和TLR3在HT中的關系，對揭示B19感染與HT的發(fā)病機制提供了新的實驗依據(jù)。
　　【目的】
　　闡明橋本氏甲狀腺炎病變甲狀腺組織中B19感染與 TLR3間的關系，為HT的病毒病因學提供新的實驗依據(jù)。
　　【方法】
　　1.用免疫組織化學SP法分別在HT標本中檢測B19及TLR3的表達情況，利用Image Pro-Plus6.0軟件得到陽性細胞數(shù)，計

6、算陽性率。
　　2.用免疫組織化學雙標法分析B19及TLR3在HT病變甲狀腺組織中的共表達（或共定位）情況。
　　3.采用spearman等級相關分析B19和TLR3在HT中的相關性，應用Fisher精確概率法分析B19和TLR3在HT和正常甲狀腺組織中表達的差異。
　　【結果】
　　1.B19和TLR3主要表達在HT病變甲狀腺組織中近淋巴濾泡的甲狀腺濾泡上皮細胞內。33例HT病例中，29例 B19陽性，4例陰性

7、；33例HT病變甲狀腺組織均表達TLR3。而在5例正常甲狀腺組織中兩者均為陰性。統(tǒng)計學分析顯示，TLR3和B19在HT（33/33,100％;29/33，88％）和正常甲狀腺組織中的表達具有顯著差異TLR3（p＜0.001），B19（p＜0.001）。
　　2.對33例HT標本TLR3和B19陽性細胞進行計數(shù)，計算陽性率并進行相關性分析，發(fā)現(xiàn)在HT中B19和TLR3表達呈顯著正相關（r=0.565, p=0.001）。