枳椇子水提取物抗疲勞耐寒耐熱耐缺氧作用的實驗研究和制劑制備.pdf

1、疲勞是一種復(fù)雜的生理現(xiàn)象，可引起官兵作業(yè)作戰(zhàn)能力減退，可導(dǎo)致一般人群工作效率降低、差錯事故增多。疲勞產(chǎn)生后，若不能及時恢復(fù)，就可能造成亞健康狀態(tài)；不斷累積，可能引發(fā)“過度訓(xùn)練綜合征”、“慢性疲勞綜合征”等，使機(jī)體內(nèi)分泌紊亂、免疫力下降，甚至出現(xiàn)器質(zhì)性病變，威脅人類健康。服用增強(qiáng)運動耐力，促進(jìn)疲勞恢復(fù)的藥物，是抗疲勞的有效措施之一。寒冷、高溫都會影響體內(nèi)代謝，是影響部隊?wèi)?zhàn)斗力的惡劣環(huán)境因素，嚴(yán)重的還會導(dǎo)致心臟及大腦供氧不足而死亡。缺氧是指

2、機(jī)體生命活動所需的氧不能得到充足的供給，可誘發(fā)機(jī)體各系統(tǒng)功能改變，威脅人體健康。因此延緩疲勞的發(fā)生和耐寒耐熱耐缺氧的藥物一直是軍事醫(yī)學(xué)及運動醫(yī)學(xué)等學(xué)科的研究重點。本實驗對藥材枳棋子(Semen Hoveniae)進(jìn)行提取，研究枳棋子水提取物(Hoveniadulcis Thunb extract HTE)增加機(jī)體耐寒耐熱耐缺氧及抗疲勞作用，并測定其所含的總黃酮及槲皮素含量，為研發(fā)具有耐寒耐熱耐缺氧抗疲勞功效的軍用特需藥物提供實驗依據(jù)。

3、 本實驗用純凈水對枳棋子藥材進(jìn)行提取，并經(jīng)醇沉。雄性昆明小鼠隨機(jī)分為：空白對照組、模型組、陽性對照組(諾迪康膠囊280mg/kg)及低、中、高(50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)3個劑量給藥組。連續(xù)給藥后，采用高溫刺激、寒冷刺激、常壓缺氧、亞硝酸鈉中毒缺氧、急性腦缺血缺氧及減壓缺氧，爬竿、爬網(wǎng)、游泳等模型考察枳椇子水提取物對動物耐寒耐熱耐缺氧抗疲勞能力的影響。檢測小鼠耐力運動時間；取肝臟及肌肉檢測糖原含量，考察枳

4、棋子水提取物對小鼠糖原儲備量的影響；耐力實驗后檢測機(jī)體生化指標(biāo)的變化情況。用H2O2刺激PC12細(xì)胞使其發(fā)生凋亡，MTT法檢測PC12細(xì)胞相對活力，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。采用比色法，以蘆丁為對照品，測定提取物中的總黃酮含量。制備枳棋子水提物片劑，采用HPLC法對提取物片劑的槲皮素含量進(jìn)行測定。 耐寒耐熱實驗證明，枳椇子水提取物高劑量組顯著延長小鼠在寒冷、高溫條件下的存活時間。缺氧實驗中枳椇子水提取物延長小鼠常壓缺氧、亞硝酸鈉

5、中毒缺氧、急性腦缺血缺氧等條件下的存活時間，并且能夠抵抗因減壓缺氧造成的機(jī)體生化指標(biāo)的改變。細(xì)胞實驗證明，枳椇子水提取物顯著提高H2O2損傷PC12細(xì)胞存活率，降低細(xì)胞凋亡及死亡比率。抗疲勞實驗中，枳棋子水提取物能夠延長小鼠爬桿、爬網(wǎng)、游泳時間，并且增加機(jī)體糖原儲備。在長時間運動后，動物體內(nèi)血紅蛋白含量，乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶總抗氧化能力均降低，丙二醛含量增加。枳椇子水提取物能夠顯著逆轉(zhuǎn)上述生化指標(biāo)的改變，增加動

6、物體內(nèi)血紅蛋白含量，提高乳酸脫氫酶，超氧化物歧化酶，谷胱甘肽過氧化物酶活性，增強(qiáng)總抗氧化能力，減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛的生成。枳棋子水提取物抵抗H2O2引起的PC12細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞凋亡率。枳椇子水提取物能夠以片劑的形式制劑，可以HPLC法測定槲皮素含量作為枳椇子片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測定法。 實驗結(jié)果表明，枳椇子水提取物具有耐寒耐熱耐缺氧抗疲勞的功效。其作用機(jī)制可能與其提高乳酸脫氫酶，超氧化物歧化酶，谷胱甘肽過氧化物酶等抗氧化酶的