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文檔簡介
1、本試驗以豬體外成熟卵子和冷凍解凍的死精子為材料,探討了豬ICSI轉基因效率的主要影響因素。其中包括注射臺溫度(30℃,38.5℃)、精子與GFP質粒孵育液溫度(4℃,24℃,39℃)、激活后6-DMAP的處理、BSA(牛血清白蛋白)、GFP質粒的濃度及結構(線形和環(huán)形)和GFP不同的表達載體,并對綠色熒光胚胎做了PCR檢測。 結果表明,注射臺溫度為30℃時的轉基因陽性率為40.07%,而38.5℃時為20.97%,差異極顯著(p
2、<0.01);但囊胚率差異不顯著(p>0.05)。精子與GFP的孵育溫度(4℃,24℃,39℃)對轉基因效率和囊胚率的影響不顯著(p>0.05),但隨著孵育溫度升高,轉基因率有降低的趨勢。精子與GFP孵育時,GFP濃度為0.01μg/μl的轉基因率(21.13%)比濃度為0.05μg/μl(50.20%)和0.1μg/μl(48.79%)的轉基因率低,差異顯著(p<0.05),但濃度為0.05μg/μl和0.1μg/μl的轉基因率沒有顯
3、著差異,而且3個濃度的囊胚率也沒有顯著差異(p>0.05)。環(huán)形GFP的轉基因率為28.62%,線形的為40.18%,差異顯著(p<0.05),但二者的囊胚率沒有顯著差異。pEGFP-N1和pbCASEGFP-LGL的轉基因效率和囊胚率都沒有顯著差異(p>0.05)。精子與GFP質粒孵育液添加BSA(0.3%)轉基因率和囊胚率差異不顯著(p>0.05);但添加BSA的囊胚轉基因率為55.56%,而對照組為33.33%,差異極顯著(p<0
4、.01)。6-DMAP處理組與對照組的轉基因率分別為52.53%和26.25%,差異極顯著(p<0.01);而且6-DMAP處理組的囊胚率(9.96%)顯著比對照組(2.30%)高(p<0.05)。PCR結果顯示綠色熒光胚胎的擴增片斷長度大概為800bp,與用pEGFP-N1質粒的擴增產物相近,說明這些胚胎攜帶了EGFP基因。 研究表明注射臺溫度對轉基因效率有明顯影響,溫度高轉基因率低;隨著精子與GFP孵育溫度的升高,轉基因率有
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