豬CFTR氯離子通道小分子抑制劑的合成、體內(nèi)分布和藥動學(xué)研究.pdf

1、囊性纖維化(Cystic fibrosis，CF)是白種人中最常見的一種致死性常染色體隱性遺傳疾病。主要臨床癥狀是反復(fù)發(fā)生的肺部感染和纖維化，并最終導(dǎo)致肺功能的不可逆性的破壞。CF是由于囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)的基因發(fā)生突變造成的。CFTR是一種受cAMP激活的Cl-通道，主要在呼吸道、小腸、胰腺等處的上皮細(xì)胞中表達(dá)。目

2、前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過1300種能夠引起CF的CFTR基因突變，其中△F508突變占全部CF患者的70％左右。由于CF發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，尚缺乏有效的治療辦法，致使CF患者的平均壽命只有35歲左右。 目前CF研究主要借助于CFTR小分子抑制劑，△F508-CFTR轉(zhuǎn)基因和CFTR基因敲除模型?！鱂508-CFTR轉(zhuǎn)基因小鼠和CFTR基因敲除小鼠已成功建立。但是由于小鼠呼吸道粘膜下腺的分布與人不同，以及其它氯離子通道的代償作用，致使上述小鼠模

3、型并不出現(xiàn)CF病人的肺部纖維化表現(xiàn)，因此急需建立一個能更好地模擬人CF病理的大動物模型。豬在器官解剖結(jié)構(gòu)和生理功能方面與人類非常相似，適于建立CF動物模型。從豬小腸組織中克隆到豬CFTR的cDNA，經(jīng)多物種之間的分析比對表明，在基因和蛋白水平上同人CFTR的相似性在90％以上，具有較高的同源性。其組織特異性表達(dá)與人相似，在支氣管、胰腺和小腸中高表達(dá)。近年來，利用高通量篩選方法從組合化學(xué)庫中篩選到對人CFTR具有特異性阻斷作用的抑制劑CF

4、TRinh-172和GlyH101。上述特異性、高親和力的CFTR阻斷劑為在大動物體內(nèi)制造CF病變模型提供了有力工具。CFTRinh-172是國際上利用高通量篩選技術(shù)獲得的第一個人CFTR特異性抑制劑，其對人、小鼠、大鼠、豬等多種動物CFTR的Cl-轉(zhuǎn)運(yùn)具有抑制作用。然而，CFTRinh-172對豬CFTR的親和力較低，且溶解性較差，在肺的分布較低，利用其制作豬CF模型的嘗試并未獲得成功。GlyH101的篩選成功為誘導(dǎo)大動物CF病變模型

5、帶來了新的希望，同CFTRinh-172相比，GlyH101具有水溶性好、作用迅速的特點(diǎn)，因此，其可能成為制作大動物CF模型的有效藥物。研究GlyH101在體內(nèi)分布和動力學(xué)特征是利用其建立動物模型的基礎(chǔ)與關(guān)鍵。 本文建立了組織樣品中GlyH101的HPLC檢測方法，對所建方法進(jìn)行了系統(tǒng)評價(線性關(guān)系，方法回收率，精密度及萃取回收率)，結(jié)果表明此方法準(zhǔn)確，可行。利用所建立的方法系統(tǒng)分析了小鼠多種組織樣品中GlyH101的動態(tài)分布。

6、首次研究了GlyH101經(jīng)腹腔注射給藥后在生物體內(nèi)的分布情況，為CFTR特異性抑制劑的動物體內(nèi)生理活性研究，以及CFTR功能蛋白敲除的大動物模型建立提供參考。由于GlyH101是利用人CFTR篩選獲得的人CFTR特異性阻斷劑，雖然與CFTRinh-172相比其在溶解度方面有了顯著改善，但是前期研究表明其對豬CFTR的親和力也不十分理想。因此，我們針對豬CFTR建立了高通量篩選細(xì)胞模型對小分子化合物庫進(jìn)行篩選。獲得了一種全新的，高親和的，