斑馬魚RPL5和RPL11缺陷致使DBA病征的分子機(jī)制研究.pdf

1、紅細(xì)胞再生障礙性貧血（Diamond-Blackfan anemia, DBA）是一種遺傳性骨髓衰竭綜合征，患者主要表現(xiàn)為先天性紅細(xì)胞發(fā)育不良以及相關(guān)的身體畸形，嚴(yán)重影響其生命健康。臨床研究發(fā)現(xiàn)有多于50％的患者伴有不同的核糖體基因突變，其中有將近20％的患者表現(xiàn)為核糖體蛋白RPL5和RPL11異常。然而在DBA患者中，RPL5和RPL11缺陷致使造血功能異常的機(jī)制尚未被完全闡明。本研究以斑馬魚為模式生物，通過顯微注射嗎啡琳類似物修飾的

2、反義寡核苷酸RPL5MO（morpholino）和RPL11MO分別獲取RPL5和RPL11缺陷的斑馬魚胚胎，通過全基因組RNA-Seq數(shù)據(jù)分析，O-染色，蘇丹黑B-染色，血細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記基因的胚胎整體原位雜交以及血液血管相關(guān)標(biāo)記基因的實時定量來檢測RPL5和RPL11缺陷對血液生發(fā)的影響，并分析證實RPL5和RPL11缺失導(dǎo)致造血功能不足；通過相應(yīng)RPL5MO和RPL11MO分別與p53MO共注射實驗以及Western Blotting

3、檢測磷酸化的AKT（pAKT），磷酸化的ERK（pERK）各自含量的變化，從而探索 RPL5和RPL11缺失致使造血功能不足的其分子機(jī)制。結(jié)果顯示在早期胚胎中，RPL5和RPL11缺陷致使與DBA患者癥狀類似的血液生發(fā)障礙以及其胚胎形態(tài)的輕度畸形；造血干細(xì)胞標(biāo)記基因（如c-myb、runx1等）表達(dá)明顯減少；共注射p53MO會減輕非正常表型，但是RPL5和RPL11缺陷的胚胎并沒有完全恢復(fù)正常；RPL5和RPL11缺陷體中pAKT和pE