斑馬魚神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型的建立及其相關(guān)分子機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：神經(jīng)膠質(zhì)瘤是一種發(fā)源于神經(jīng)外胚層的常見顱內(nèi)腫瘤，臨床上以浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和廣泛侵襲性為主要特點(diǎn)并伴有轉(zhuǎn)移現(xiàn)象的發(fā)生，已成為危害人類生命健康的主要腫瘤之一。盡管診斷和治療水平的提高使得神經(jīng)膠質(zhì)瘤的局控率有明顯改善，但是目前臨床上仍無法找到克服膠質(zhì)瘤廣泛侵襲和轉(zhuǎn)移的好辦法。在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中，以往主要是在體外去研究膠質(zhì)瘤發(fā)病的分子機(jī)理，相關(guān)的體內(nèi)分子機(jī)制研究主要是使用傳統(tǒng)的嚙齒動(dòng)物——大小鼠模型。此類模型周期長(zhǎng)，效率低，也很難動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤的體

2、內(nèi)發(fā)展情況。這些缺點(diǎn)極大的制約了膠質(zhì)瘤體內(nèi)分子作用機(jī)制的研究。因此，建立新的膠質(zhì)瘤模型，全面地解析神經(jīng)膠質(zhì)瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，深入探索神經(jīng)膠質(zhì)瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)標(biāo)志物，是有效控制神經(jīng)膠質(zhì)瘤進(jìn)一步惡化，提高患者生存率的關(guān)鍵。斑馬魚作為脊椎動(dòng)物模式生物具備了自己很多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：它易于飼養(yǎng)，經(jīng)濟(jì)方便，產(chǎn)卵量高，斑馬魚體外受精，胚胎透明，易于實(shí)驗(yàn)觀察，其基因組與人來有著高度的同源性，分子遺傳學(xué)操作簡(jiǎn)便易行。在自然界中，斑馬魚也會(huì)自發(fā)產(chǎn)生各利

3、組織器官的癌變，并且與人類的腫瘤在器官和組織水平上都有著很大的相似性，其致癌基因也與人類的癌癥相關(guān)基因有著很大的保守性。斑馬魚腫瘤模型在抗腫瘤藥物篩選及其分子靶標(biāo)研究中更是具備了高效性和動(dòng)態(tài)觀察的優(yōu)勢(shì)，并逐漸成為國(guó)際上腫瘤體內(nèi)研究中的熱門工具。
　　 目的：我們借助斑馬魚胚胎建立膠質(zhì)瘤模型可以解決神經(jīng)膠質(zhì)瘤體內(nèi)分子作用機(jī)制研究中周期長(zhǎng)和效率低的難點(diǎn)，并可以高效的進(jìn)行抗腫瘤藥物的篩選。利用此種模式生物，我們可以研究神經(jīng)膠質(zhì)瘤體內(nèi)治

4、療中新的分子作用靶標(biāo)及其信號(hào)通路中靶標(biāo)分子的作用機(jī)制，為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療尋找新的突破。
　　 方法：首先使用細(xì)胞生物學(xué)方法建立熒光標(biāo)記的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，接著使用顯微注射法將膠質(zhì)瘤細(xì)胞移植入斑馬魚體內(nèi)，最后使用原位雜交、熒光定量RT-PCR、血管內(nèi)源性堿性磷酸酶染色及熒光顯微鏡直接觀察轉(zhuǎn)基因魚等方法檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和斑馬魚的相關(guān)變化情況。
　　 結(jié)果：我們成功的建立了斑馬魚神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型，并發(fā)現(xiàn)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞可以在斑馬魚胚胎體內(nèi)