玉米細(xì)菌性葉斑病病原菌的分離與特性鑒定.pdf

1、目前已報(bào)道的玉米細(xì)菌性病害有13種，多表現(xiàn)為細(xì)菌性葉斑癥狀。本研究分離了國(guó)內(nèi)不同玉米產(chǎn)區(qū)玉米細(xì)菌性葉斑病的疑似致病菌，通過(guò)致病性測(cè)定，確定了一株玉米細(xì)菌性葉斑病致病菌株。經(jīng)細(xì)菌的常規(guī)鑒定與分子鑒定明確了致病菌株為PantoeaananatisSerrano，并根據(jù)該菌株的ITS序列設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物對(duì)其進(jìn)行快速檢測(cè)。主要研究結(jié)果如下： 1.分離純化了來(lái)自國(guó)內(nèi)不同地區(qū)的57份玉米病葉標(biāo)本，共篩選到35株細(xì)菌。采用多種方法對(duì)它們的

2、致病性進(jìn)行了測(cè)定：菌懸液注射接種煙草結(jié)果表明，35株菌株中有20株具有毒性；苗期噴霧接種試驗(yàn)表明，從津、京、冀地區(qū)天塔8號(hào)品種上分離到的菌株TJ-1-1、BJ-3-1、HB-1-1可引起相似的細(xì)菌性葉斑病癥狀，從回接發(fā)病的病株上分別分離到了菌株T8-TJ、T8-BJ、T8-HB；細(xì)菌懸浮液浸種試驗(yàn)中TJ-1-1、BJ-3-1、HB-1-1也能夠引起玉米細(xì)菌性葉斑病癥狀的產(chǎn)生。試驗(yàn)結(jié)果表明，三株細(xì)菌菌株對(duì)玉米均表現(xiàn)出較強(qiáng)的致病性。同時(shí)，根

3、據(jù)致病性測(cè)定結(jié)果從玉米品種天塔8號(hào)種子中分離到一株優(yōu)勢(shì)細(xì)菌菌株T8-1。 2.通過(guò)菌落形態(tài)觀察，鞭毛電鏡觀察，革蘭氏染色試驗(yàn)等一系列常規(guī)細(xì)菌生理生化測(cè)試證明TJ-1-1、BJ-3-1、HB-1-1、T8-TJ、T8-BJ、T8-HB、T8-1為同一種細(xì)菌-Pantoeaananatis(鳳梨泛菌)。 3.選用16SrDNA通用引物16sF(5'-ATTGAACGCTGGCGGCAGGCCT-3’)/16sR(TCCCTA

4、CGGTTACCTTGTTA-3’)與ITS通用引物L(fēng)1(5'-AGTCGTAACAAGGTAGCCGT-3’)/L2(5'-GTGCCAAGGCATCCACC-3’)，對(duì)從天塔8號(hào)罹病玉米種子中分離到的細(xì)菌菌株T8-1進(jìn)行擴(kuò)增，得到大小約為1500bp(16SrDNA)與500bp(ITS)的DNA片段。對(duì)T8-1的16SrDNA序列克隆測(cè)序后進(jìn)行BLAST搜索，結(jié)果表明T8-1與鳳梨泛菌Pantoeaananatis(AF36484

5、7)的相似程度最高達(dá)98％，可確定為同屬同種細(xì)菌。分子鑒定結(jié)果同病原細(xì)菌常規(guī)鑒定結(jié)果相吻合。 4.本試驗(yàn)擴(kuò)增并克隆了致病菌株P(guān)antoeaananas的ITS序列(目前尚未有該菌ITS序列的相關(guān)報(bào)道)。通過(guò)對(duì)其ITS序列分析，并與其余供試菌株的ITS序列比對(duì)，獲得了該菌株的特異性引物片段P1作為上游引物，同時(shí)設(shè)計(jì)了一段位于23SrRNA基因保守區(qū)的序列P2作為下游引物。GeneBank的BLAST搜索及供試菌株的擴(kuò)增結(jié)果表明：引