玉米細(xì)菌性葉斑病病原菌鑒定與分子檢測.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、玉米細(xì)菌性葉斑病是指由幾類細(xì)菌引起的玉米多種葉部斑點病的總稱,病原菌種類和病害癥狀均表現(xiàn)出多樣性。近幾年來,該病有逐年加重的趨勢,感病品種既有普通玉米,也有甜糯玉米,據(jù)調(diào)查,在我國大部分地區(qū)均有發(fā)生。玉米細(xì)菌性葉斑病具有傳播快、發(fā)病迅速、控制難度大等特征,已在局部地區(qū)開始影響玉米生產(chǎn),但是國內(nèi)外對其的研究卻很少。
   本論文通過對菌株的致病性測定和培養(yǎng)性狀的觀察,選擇致病性較強、引起病害較廣泛且嚴(yán)重的褪綠斑型癥狀的病原菌開展研

2、究。通過常規(guī)的形態(tài)學(xué)觀察和生理生化鑒定、全細(xì)胞脂肪酸測定和16S rDNA序列特征分析,將這類菌株鑒定為巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium。同時利用已發(fā)表的特異引物對Pantoea ananatis進(jìn)行分子檢測。
   利用細(xì)菌16S-23S rDNA ITS通用引物L(fēng)1/L2對病原菌B. Megaterium的ITS序列進(jìn)行擴(kuò)增,得到大小為125 bp的片段。將所獲片段在NCBI中進(jìn)行Blast同源序列檢索后,

3、利用引物設(shè)計軟件premier5.0 設(shè)計出特異性引物BaF1/ BaR1。該引物只能從目標(biāo)菌中擴(kuò)增出1條大小為125 bp的產(chǎn)物,非B. Megaterium的參試菌株均無擴(kuò)增條帶,表明該引物具有很高的特異性。利用該引物檢測B. Megaterium的菌懸液和基因組DNA的靈敏度分別達(dá)到了3×104 CFU/mL和6 pg/ μL,從而建立了B. Megaterium的分子快速檢測體系,在實踐中僅用特異性引物BaF1/ BaR1即可對

4、B. Megaterium進(jìn)行檢測。
   從保存的玉米細(xì)菌性葉斑病分離物中,將與B. Megaterium和P. Ananatis菌落形態(tài)和培養(yǎng)性狀相似的菌株挑選出來,其中用特異引物BaF1/ BaR1將分離自浙江、海南和云南的10株菌擴(kuò)增出125 bp的特異性條帶,鑒定為B. Megaterium;而用特異引物PanITS2-1F/PanITS2-1R將分離自浙江、海南和北京的其他7株菌擴(kuò)增出363 bp的特異性條帶,鑒定為

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