黃芪化學(xué)成分及其對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)活性的研究.pdf

1、蒙古黃芪(Astragalusmembranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus)為豆科(Leguminosae)黃芪屬植物，是中國(guó)傳統(tǒng)重要的補(bǔ)益藥之一。具有益氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫、托毒生肌的功效。 本研究主要利用色譜的方法，結(jié)合細(xì)胞生物學(xué)活性分析，對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行跟蹤分離，采用光譜技術(shù)(紅外，紫外、核磁共振波譜和質(zhì)譜技術(shù))對(duì)得到的10個(gè)單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析和鑒定，分別鑒定為芒柄花素、芒柄花苷、

2、毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷、9，10-二甲氧基紫檀烷3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、腺苷、肌醇甲苷、胡蘿卜苷、β-谷甾醇和蔗糖，其中腺苷和肌醇甲苷為首次從該植物中分離得到。 選用神經(jīng)細(xì)胞的模式細(xì)胞株P(guān)C12(ratpheochromocytomacellline)細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶(xanthine/xanthineoxidase，XA/XO)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行損傷，造成直接的氧化損傷模型。利用MTT(3-(4，5-

3、dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenylterazoliumbromide)法分別檢測(cè)了五種黃芪異黃酮對(duì)損傷的PC12細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)；采用LDH(lactatedehydrogenase)法和熒光染色法，檢測(cè)了五種異黃酮對(duì)細(xì)胞膜的影響；同時(shí)檢測(cè)了芒柄花素、毛蕊異黃酮及其苷對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗氧化體物GSH(glutathione)和抗氧化酶SOD(superoxidedismutase)、GSH-Px(glutathi

4、oneperoxidase)等的影響。結(jié)果表明0.1μg/ml毛蕊異黃酮和0.05μg/ml芒柄花素對(duì)損傷細(xì)胞具有明顯的保護(hù)活性，能通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)源性抗氧化物含量，降低膜的流動(dòng)性，穩(wěn)定膜結(jié)構(gòu)，來(lái)提高細(xì)胞的抗氧化能力，減輕細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化程度，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。 利用DPPH(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)法和黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系檢測(cè)了五種黃芪異黃酮在體外的直接抗氧化活性。毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷

5、和芒柄花素對(duì)DPPH有機(jī)自由基的清除活性依次減弱，活性的大小與結(jié)構(gòu)中羥基的位置和數(shù)目密切相關(guān)，由于半數(shù)有效劑量均高于100μg/ml，所以不是高效的有機(jī)自由基清除劑；在XA/XO體系中，五種異黃酮不具有清除超氧自由基的能力。同時(shí)，毛蕊異黃酮及其苷對(duì)黃嘌呤氧化酶具有較弱的抑制作用，它們的IC50大于40μM，也不是強(qiáng)的酶活抑制劑。鑒于黃芪異黃酮直接的抗氧化能力較弱，而且，在無(wú)細(xì)胞體系中的有效濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于在細(xì)胞體系中的有效濃度，因此，黃芪異

6、黃酮對(duì)氧化損傷的PC12細(xì)胞的保護(hù)作用不是源于它們直接的抗氧化活性。 利用高濃度的谷氨酸對(duì)細(xì)胞進(jìn)行損傷，造成間接的氧化損傷模型，結(jié)果表明黃芪異黃酮對(duì)這種細(xì)胞損傷具有更強(qiáng)的保護(hù)作用。0.1μg/ml的芒柄花素和毛蕊異黃酮可以明顯保護(hù)細(xì)胞免受損傷。它們通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)源性抗氧化物含量，穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，提高損傷細(xì)胞Bcl-2蛋白的表達(dá)，降低細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化程度，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。 總之，本研究明確了黃芪中對(duì)氧化損傷的PC12細(xì)胞