毛白楊癭木形成的解剖學(xué)特征初步研究與毛白楊體內(nèi)農(nóng)桿菌的檢測(cè).pdf

1、癭木因其多變的色彩，美麗大方的紋理被廣泛的應(yīng)用于珍貴家具的貼面和各種各樣的工藝品的制作上。但由于癭木自身形成的特殊過(guò)程，使癭木生產(chǎn)受到限制。本課題研究的目的是利用微生物的致病性進(jìn)行癭木的培育，以獲得更多的癭木原材料。本文以毛白楊雄株-D組織培養(yǎng)苗為實(shí)驗(yàn)材料，利用根癌農(nóng)桿菌侵染植物的特性，對(duì)毛白楊雄株-D進(jìn)行了野生根癌農(nóng)桿菌致瘤基因的轉(zhuǎn)化，建立了轉(zhuǎn)致瘤基因的毛白楊的再生體系；對(duì)被致瘤根癌農(nóng)桿菌侵染的毛白楊雄株-D的莖及發(fā)生的癭瘤，進(jìn)行細(xì)胞

2、組織學(xué)觀察；最后對(duì)致瘤根癌農(nóng)桿菌接種毛白楊雄株-D后，其在植物體內(nèi)的分布進(jìn)行了檢測(cè)。 本試驗(yàn)主要得出以下結(jié)論：1.毛白楊雄株-D被根癌農(nóng)桿菌侵染后，取第5d和第30d腫瘤及其附近的莖組織，進(jìn)行解剖結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)：當(dāng)致瘤農(nóng)桿菌侵染毛白楊莖組織時(shí)，形成層細(xì)胞和木質(zhì)部薄壁細(xì)胞對(duì)農(nóng)桿菌最為敏感，接種位置的形成層向外分裂的細(xì)胞數(shù)量明顯增多，同時(shí)木質(zhì)部的薄壁細(xì)胞以及髓心部位也產(chǎn)生大量細(xì)胞，并逐漸分化成木質(zhì)部細(xì)胞，這說(shuō)明該部位可能是腫瘤細(xì)胞形成

3、過(guò)程中，細(xì)胞發(fā)生分裂的起始部位。由于冠癭細(xì)胞的大量增生，對(duì)莖的組織結(jié)構(gòu)也產(chǎn)生了一定的影響，寄主的莖橫切面呈不規(guī)則圓形，增生部位的髓射線明顯增多，而正常植株只有少數(shù)幾列或者不明顯。維管束中，導(dǎo)管數(shù)量減少，接種部位下寄主維管束增生后，導(dǎo)管口徑增大，而接種部位以上寄主維管束中導(dǎo)管口徑變小。在瘤體組織中可明顯觀察到維管束的分化，通常木質(zhì)部成分被韌皮部成分包被，木質(zhì)部元素呈樹(shù)狀分支或渦旋狀分布，并和寄主維管束相連接。 2.用根癌農(nóng)桿菌(A

4、grobacteriumtumfacience)三個(gè)菌株感染轉(zhuǎn)雙抗蟲(chóng)基因毛白楊雄株-D無(wú)菌苗，誘導(dǎo)冠癭瘤，結(jié)果表明1-1-2菌株的的毒性(致瘤能力)最強(qiáng)，毛白楊雄株-D冠癭組織經(jīng)除菌后能在無(wú)激素的培養(yǎng)基上良好生長(zhǎng)，MS培養(yǎng)基附加TDZ0.1mg/L+IBA1.0mg/L誘導(dǎo)毛白楊再生植株的頻率最高。對(duì)誘導(dǎo)分化的再生植株進(jìn)行高壓紙電泳和PCR檢測(cè)，有三個(gè)系號(hào)檢測(cè)到冠癭堿，同時(shí)也檢測(cè)到外源基因(iaaH,tml,chvD)的特異擴(kuò)增條帶，這

5、表明Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化毛白楊雄株-D成功。 3.致瘤根癌農(nóng)桿菌1-1-2針刺接種組培苗后，在一個(gè)月以后進(jìn)一步分離植物各個(gè)器官中的細(xì)菌，并采用PCR技術(shù)檢測(cè)目的菌在植物中的分布，在組培苗植株的根，莖，葉，瘤中均分離并檢測(cè)到了目的菌株的存在，推測(cè)毛白楊組培苗莖部被接種以后，根癌農(nóng)桿菌可能在毛白楊樹(shù)體內(nèi)隨樹(shù)液流動(dòng)而分布到其它各個(gè)器官。根癌農(nóng)桿菌人工接種大田毛白楊雄株后，對(duì)樹(shù)體各個(gè)器官進(jìn)行細(xì)菌的分離，結(jié)果只在冠癭瘤中分離并檢測(cè)到目的菌，在植物