慈竹BeSUSs基因表達模式分析及其遺傳轉(zhuǎn)化毛白楊的研究.pdf

1、本文以慈竹為材料，克隆了BeSUS6和BeSUS7基因；對BeSUSs基因的生物信息學(xué)、表達模式以及亞細胞定位進行了分析；構(gòu)建了過表達載體并轉(zhuǎn)化毛白楊，為SUS大型叢生竹遺傳改良中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。主要的研究結(jié)果如下：
　　1.在實驗室已經(jīng)得到5個SUS基因全長序列（BeSUS1、BeSUS2、BeSUS3、BeSUS4和BeSUS5）的基礎(chǔ)上，根據(jù)慈竹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫繼續(xù)克隆得到2個慈竹新 SUS基因，將其分別命名為BeSUS6和

2、BeSUS7，全長分別為2526bp和2550bp，編碼841和849個氨基酸。GenBank注冊號為KY421768和KY421769。
　　2.采用Real-Time PCR技術(shù)對慈竹BeSUS基因的組織表達模式進行了研究，結(jié)果表明，在根、莖、葉和筍都有表達，但表達情況各不相同。BeSUS3除展開葉以外，在其他所有組織中，其表達量均是最高的；BeSUS1和BeSUS7在所有組織中表達量均較低；BeSUS5基因只在筍中表達較高，

3、在其它組織中表達很低；BeSUS6基因在展開葉中表達最高，在其它組織表達較低。
　　3.慈竹BeSUSs基因ABA、MEJA和干旱脅迫表達分析表明，BeSUS4、BeSUS5和BeSUS7基因響應(yīng)ABA脅迫，BeSUS1、BeSUS5和BeSUS7基因響應(yīng)MEJA脅迫；BeSUS6和BeSUS7基因響應(yīng)干旱脅迫。BeSUS7基因同時對ABA、MEJA和干旱三種脅迫響應(yīng)。
　　4.筍不同部位BeSUSs基因表達量研究表明，Be

4、SUS3、BeSUS4和BeSUS5對筍的生長發(fā)育有重要作用。
　　5.亞細胞定位結(jié)果表明，BeSUS2定位在細胞膜上，BeSUS4則定位于細胞膜和細胞質(zhì)。
　　6.構(gòu)建了pCAMBIA1303N-BeSUS2/4/5/6/7過表達載體，并以農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化毛白楊。經(jīng)PCR鑒定，成功獲得了BeSUS2轉(zhuǎn)基因毛白楊11株，BeSUS4轉(zhuǎn)基因毛白楊11株；BeSUS5轉(zhuǎn)基因14株；BeSUS6轉(zhuǎn)基因13株。轉(zhuǎn)基因植株半定量