宮頸腺癌發(fā)生中PTEN基因突變和表達(dá)與HPV感染的研究.pdf

1、背景和目的：宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一,其組織學(xué)類(lèi)型主要有鱗癌和腺癌,鱗癌占宮頸癌的大多數(shù),但近年來(lái)宮頸腺癌的發(fā)病率有上升趨勢(shì),尤其在較年輕的年齡組發(fā)病率明顯上升。目前宮頸腺癌的病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚。其早期診斷和鑒別診斷困難。較之鱗癌更易于發(fā)生血行和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。對(duì)于癌前病變的認(rèn)識(shí)遠(yuǎn)不如宮頸鱗癌癌前病變那樣明確和熟悉。因此,宮頸腺癌引起了人們的普遍關(guān)注。與張力蛋白同源、第10染色體缺失的磷酸酶基因(phosphate and te

2、nsinhomology deleted on chromose ten,PTEN)基因是1997年發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因,對(duì)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡起重要的調(diào)節(jié)作用。其在多種腫瘤組織中存在突變?nèi)笔Ш捅磉_(dá)異常,尤其在子宮內(nèi)膜癌中為突變率最高的基因,且為子宮內(nèi)膜癌癌變過(guò)程中的早期事件。由于宮頸腺癌與子宮內(nèi)膜癌在病因?qū)W和組織學(xué)形態(tài)上有相似性,推測(cè)PTEN基因在宮頸腺癌癌變過(guò)程中與子宮內(nèi)膜癌有類(lèi)似。PTEN在宮頸腺癌中的表達(dá)情況研究較少,而PTEN

3、在宮頸腺癌中的突變情況在國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道。宮頸腺癌癌前病變中PTEN基因突變情況在國(guó)內(nèi)外均尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo),有進(jìn)一步研究的必要。高危型人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染已被認(rèn)為是宮頸鱗癌發(fā)病的必要因素,而在宮頸腺癌中的感染情況研究較少,但現(xiàn)有的研究結(jié)果顯示高危型HPV感染與宮頸腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。普遍認(rèn)為在宮頸癌的發(fā)生過(guò)程中除HPV感染以外,還需其他的分子事件的參與,抑癌基因的失活就是其機(jī)制之一。本研究檢

4、測(cè)了正常宮頸腺上皮組織、宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤和宮頸腺癌中抑癌基因PTEN的表達(dá)和突變和HPV感染情況,探討PTEN基因表達(dá)和突變與HPV感染在宮頸腺癌發(fā)生中的作用,分析宮頸腺癌發(fā)生機(jī)制中PTEN基因與HPV的關(guān)系,以期發(fā)現(xiàn)較好的宮頸腺癌早期診斷分子指標(biāo)。
　　材料和方法：42例宮頸腺癌和20例宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤存檔蠟塊取自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科、鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院病理科和鄭州市婦幼保健院病理科,并按WHO宮頸腺癌的分型標(biāo)準(zhǔn)分型。4

5、2例宮頸腺癌中粘液腺癌19例,子宮內(nèi)膜樣腺癌10例,其它變型13例(漿液型腺癌2例,透明細(xì)胞癌4例,腺鱗癌5例,低分化難以分型的癌2例),所有病例由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師復(fù)驗(yàn)證實(shí)。正常宮頸組織28例,為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科因子宮肌瘤手術(shù)切除的正常宮頸組織存檔蠟塊。宮頸腺癌組、宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤組、正常宮頸腺上皮組中<45歲者分別有29例、15例、18例,≥45歲者分別有13例、5例、10例,三組間年齡構(gòu)成比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.

6、05)。免疫組化SP法檢測(cè)42例宮頸腺癌、20例宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤和28例正常宮頸腺上皮組織中PTEN蛋白表達(dá),PCR-SSCP(polymerase chain reaction- single strand conformation polymorphism)法檢測(cè)上述90例組織中PTEN基因第5、8外顯子突變情況,原位雜交廣譜HPV探針檢測(cè)90例標(biāo)本的HPV感染情況。多個(gè)率的比較采用行×列表的x~2檢驗(yàn)、兩個(gè)率的比較采用四格表資料的

7、x~2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法,相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。用SPSS11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。取雙側(cè)α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：1.宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤、宮頸腺癌和正常宮頸腺上皮組織PTEN陽(yáng)性表達(dá)率分別為25.00％(5/20)、54.76％(23/42)和100.00％(28/28)。宮頸腺癌和宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤PTEN陽(yáng)性表達(dá)率均低于正常宮頸腺上皮組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤P

8、TEN陽(yáng)性表達(dá)率低于宮頸腺癌,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸腺癌不同組織學(xué)變型中粘液型腺癌、子宮內(nèi)膜樣型腺癌和其它變型PTEN陽(yáng)性表達(dá)率分別為47.37％(9/19),20.00％(2/10)和92.31％(12/13),粘液型腺癌和子宮內(nèi)膜樣型腺癌PTEN陽(yáng)性表達(dá)率均低于其它變型,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。子宮內(nèi)膜樣型腺癌PTEN陽(yáng)性表達(dá)率和粘液型腺癌差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2.宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤和宮頸腺癌PT

9、EN外顯子5、8突變率分別為45.00％(9/20)和19.04％(8/42),正常宮頸組織中未檢測(cè)到突變標(biāo)本。宮頸腺癌和宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤PTEN外顯子5、8突變率均高于正常宮頸組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤PTEN外顯子5、8突變率高于宮頸腺癌,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸腺癌不同組織學(xué)變型中粘液型腺癌和子宮內(nèi)膜樣型腺癌PTEN基因外顯子5、8突變率分別為21.05％(4/19)和40.00％(4/

10、10),其它變型外顯子5、8突變?yōu)?(0/13)。子宮內(nèi)膜樣型腺癌PTEN外顯子5、8突變率高于其它變型,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。粘液型腺癌PTEN外顯子5、8突變率與子宮內(nèi)膜樣型、其它變型相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3.PTEN基因突變與PTEN蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān),兩者關(guān)系密切(P<0.05,r_s=-0.619,Pearson列聯(lián)系數(shù)P=0.964),PTEN基因突變組蛋白表達(dá)無(wú)1例陽(yáng)性,而未突變組陽(yáng)性表達(dá)56例

11、,PTEN突變組蛋白表達(dá)陽(yáng)性率低于未突變組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.宮頸腺癌、宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤、宮頸正常腺上皮HPV感染陽(yáng)性率分別為為57.14％(24/42)、60.00％(12/20)和17.86％(5/28)。宮頸腺癌、宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤中的HPV感染陽(yáng)性率均高于正常宮頸腺上皮組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),宮頸腺癌中HPV感染陽(yáng)性率與宮頸腺上皮內(nèi)腫瘤差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5.HPV陽(yáng)性組PTEN表

12、達(dá)缺失率為36.59％(15/41),HPV陰性組PTEN表達(dá)缺失率為38.78％(19/49),兩者相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。6.HPV陽(yáng)性組PTEN基因第5、8外顯子突變率為4.89％(2/41)。HPV陰性組PTEN基因第5、8外顯子突變率為30.61％(15/49),HPV感染與PTEN突變相關(guān),呈負(fù)相關(guān)(P<0.05,r_s=-0.327)。HPV陰性組PTEN基因突變率高于HPV陽(yáng)性組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.