BCG-DNA對(duì)支氣管哮喘的防治作用及機(jī)制研究.pdf

1、支氣管哮喘是一種呼吸系統(tǒng)的常見(jiàn)病，近年來(lái)其發(fā)病率、死亡率逐年增高.目前研究認(rèn)為支氣管哮喘發(fā)病與Th1/Th2型淋巴細(xì)胞比例失衡密切相關(guān)，主要表現(xiàn)為Th2細(xì)胞數(shù)目增多、功能亢進(jìn).因此研究如何促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，抑制Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生從而控制哮喘變態(tài)反應(yīng)發(fā)生、發(fā)展成為人們普遍關(guān)注的熱點(diǎn).該課題以這一研究思路為切入點(diǎn)，首先建立小鼠哮喘模型，然后采用超聲破菌法分離純化較高純度的BCG-DNA.通過(guò)觀察BCG-DNA對(duì)小鼠哮喘模型

2、過(guò)敏性氣道炎癥的防治作用及對(duì)相關(guān)細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響，觀察BCG-DNA對(duì)哮喘患者外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響，探討其可能的作用機(jī)制.以期為臨床提供一種免疫調(diào)節(jié)能力強(qiáng)、毒副作用少的哮喘防治藥物.方法：（1）BCG-DNA氣道內(nèi)應(yīng)用對(duì)哮喘小鼠過(guò)敏性氣道炎癥的影響.超聲破菌法分離純化較高純度的BCG-DNA，BALB/C小鼠經(jīng)雞卵蛋白免疫建立哮喘模型，分別于致敏前12h、激發(fā)后12h氣道內(nèi)滴入100μg BCG-DNA，最后一

3、次激發(fā)24h后頸椎脫臼處死動(dòng)物，觀察哮喘小鼠支氣管肺泡灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸粒細(xì)胞百分比，ELISA檢測(cè)肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-12、IFN-γ的含量變化，常規(guī)病理切片觀察小鼠肺內(nèi)炎癥情況，AB-PAS染色觀察杯狀細(xì)胞增生和粘液分泌情況.（2）BCG-DNA氣道內(nèi)應(yīng)用對(duì)哮喘小鼠肺組織GATA-3及Eotaxin表達(dá)的影響.建立小鼠哮喘模型，分別于致敏前12h、激發(fā)后12h氣道內(nèi)滴入100μg BCG-DNA，最后一次激發(fā)

4、24h后處死動(dòng)物，免疫組化染色觀察肺組織GATA-3蛋白的變化，RT-PCR觀察BCG-DNA對(duì)小鼠哮喘模型肺部GATA-3 mRNA、Eotaxin mRNA表達(dá)的影響.（3）BCG-DNA對(duì)哮喘患者外周血單個(gè)核細(xì)胞Th1/Th2細(xì)胞因子產(chǎn)生的作用.分離哮喘患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，分別加入BCG-DNA、地塞米松，37℃ 5％CO<,2>培養(yǎng)72小時(shí)，ELISA方法測(cè)定培養(yǎng)上清中的IFN-γ、IL-4水平，RT-PCR檢測(cè)IFN-γmR

5、NA、IL-4mRNA表達(dá)情況.結(jié)論：（1）運(yùn)用超聲破菌的方法快速抽提BCG-DNA，使細(xì)菌破碎完全，避免了溶菌酶、SDS、蛋白酶K的使用，大大降低了成本，得率提高，重復(fù)性好.（2）BCG-DNA局部應(yīng)用具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，不但可以促使Th0細(xì)胞向Th1分化，預(yù)防Th2型細(xì)胞反應(yīng)的發(fā)生，而且在Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答已經(jīng)建立的情況下也可以將其部分或完全逆轉(zhuǎn).因此，BCG-DNA不僅能用于哮喘的預(yù)防，還可以用于哮喘的治療.（3）BCG-DNA能