2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、在對(duì)樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)cDNA文庫進(jìn)行大規(guī)模測(cè)序的過程中,我們發(fā)現(xiàn)了許多新的與免疫功能和基本生命調(diào)控密切相關(guān)的全長基因.本研究擬對(duì)已經(jīng)進(jìn)行初步研究的新型小GTPase RabJ進(jìn)行進(jìn)一步的功能及其作用機(jī)制研究.RabJ的全長cDNA來源于樹突狀細(xì)胞,包含822bp的開放閱讀框,編碼273個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),在人睪丸組織中呈優(yōu)勢(shì)表達(dá),在人腫瘤細(xì)胞系中有廣泛的表達(dá).以前的研究提示其主要定位于細(xì)胞核,可以和熱休克蛋

2、白(heat shock protein,HSP)HSC70結(jié)合.但是其確切的生物學(xué)功能仍然未知.經(jīng)過深入的研究和探討,我們證明并推測(cè)RabJ可能參與對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期調(diào)控、腫瘤發(fā)生等細(xì)胞生物學(xué)功能的調(diào)控.首先,我們利用RT-PCR、免疫組化等方法進(jìn)一步確認(rèn)了RabJ的細(xì)胞和組織分布的特點(diǎn).利用多種細(xì)胞系和小鼠組織的總RNA,通過RT-PCR方法研究發(fā)現(xiàn),RabJ是一個(gè)分布比較廣泛的分子,在HeLa、Jurkat、Molt-4、NB4

3、、THP-1、U937、MCF-7、PC-3等多種人源造血細(xì)胞系白血病細(xì)胞和實(shí)體瘤內(nèi)均有較高的表達(dá);在小鼠細(xì)胞系A(chǔ)20、EL-4、P815、B16、3LL內(nèi)均有不同程度的表達(dá),在小鼠的正常細(xì)胞系3T3和骨髓基質(zhì)細(xì)胞系TC-1內(nèi)卻沒有表達(dá);在C57BL/6小鼠睪丸、卵巢、腎臟、脾臟、大腦、胃、結(jié)腸和骨骼肌等組織內(nèi)有不同程度表達(dá),在胸腺、肝臟、心臟、肺內(nèi)卻沒有表達(dá).然后,我們研究了RabJ的亞細(xì)胞定位.對(duì)RabJ的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行進(jìn)一步的分析

4、,我們發(fā)現(xiàn)在其氨基端18個(gè)氨基酸片段內(nèi)含有兩個(gè)富含堿性氨基酸的區(qū)域,與描述的細(xì)胞核定位信號(hào)(nuclear localization signal,NLS)Lys-Arg/Lys-X-Arg/Lys非常類似.為了證明RabJ與細(xì)胞增殖的關(guān)系,我們構(gòu)建了全長RabJ和結(jié)構(gòu)缺失突變體,包括hRabJ(1-273)、hRabJ(1-208)、hRabJ(209-273)、hRabJ(19-208)、hRabJ(19-273).在RabJ陰性表

5、達(dá)的NIH3T3細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染上述載體,使用新霉素(600-1000 μg/ml)連續(xù)篩選3周,經(jīng)過有限稀釋,建立了穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系.我們用[3H]-TdR摻入法,觀測(cè)了細(xì)胞增殖的速率.總之,我們對(duì)癌基因樣蛋白R(shí)abJ進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,初步揭示其生物學(xué)功能與細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化的調(diào)控相關(guān).RabJ可能是一個(gè)癌基因樣小G蛋白,因?yàn)槠淇梢源偈拐3衫w維細(xì)胞NIH3T3細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化,并且在體內(nèi)產(chǎn)生致瘤性.其作用機(jī)制可能是通過作為磷酸化MEK1/2的胞

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